[发明专利]用于诊断和治疗钩端螺旋体病的方法和蛋白质抗原组合物

说明书

本申请要求于2012年12月12日提交的临时申请号61/736391的优先权。这些和所有其它引用的外来材料的全部内容均以引用方式并入本文中。当以引用方式并入的参考文献中的术语的定义或使用与本文提供的术语的定义不一致或相反时，以本文提供的该术语的定义为准。

技术领域

本发明的领域是用于诊断和治疗各种病症和疾病、特别是钩端螺旋体病的组合物和方法。

背景技术

钩端螺旋体病是由感染钩端螺旋体属(Leptospira)细菌而引起的广泛的重大疾病。所述疾病由于人与受感染的家养动物或野生动物接触或通过与它们的尿液接触而传播给人。众多种动物物种可充当所述细菌的储库。因此，人钩端螺旋体病经常被认为是最广泛的动物传染性疾病。传统处于患钩端螺旋体病的高风险的群体包括农夫、兽医、军事人员、矿工和处理污水的个体。然而，也已经观察到不同的传播模式。已经将钩端螺旋体病的爆发与例如强调户外活动的生态旅游和体育赛事的娱乐活动关联。

患有钩端螺旋体病的个体在所述疾病的早期阶段显示众多种相对非特异性的临床症状，包括发热、头痛、发冷和严重的肌肉疼痛，使得基于临床发现的早期诊断变得困难。遗憾的是，5-15％的感染导致严重的多系统并发症，包括黄疸、肾衰竭和出血。严重的钩端螺旋体病具有5-40％的死亡率。与严重贫困相关的状况已导致钩端螺旋体病在巴西和其它国家市区的流行，且具有高死亡率。

不仅对于评估疾病的全球负担，而且对于提供早期诊断来说，缺乏快速且可靠的现场护理(point-of-care)诊断测试都是主要障碍。当前的诊断测试主要依赖于结合钩端螺旋体脂多糖(LPS)的抗体的检测并且对于抗生素疗法最有效的早期疾病是不灵敏的。

特别是在疾病的早期可治疗时期，钩端螺旋体病的诊断是困难的。目前，存在钩端螺旋体属的最直接证明是通过分离和培养或PCR。遗憾的是，细菌学分离是昂贵的过程，需要训练有素的技术人员和专门的设施。在钩端螺旋体病的情况下，钩端螺旋体属的敏感特性使这进一步复杂化，其需要使用非常新鲜的样品。另外，所述生物体在培养中生长相对缓慢，得出结果需要数周。因此，PCR被证明是用于在样品中鉴别钩端螺旋体属的更有用工具。然而，PCR方法仍然需要专门的设备和高技术水平来恰当地进行，并且尽管是灵敏的，但可能不足以定量评估钩端螺旋体属感染的时期。

钩端螺旋体病还可以使用表征个体对所述生物体的免疫反应的血清学方法来诊断。目前用于钩端螺旋体病的血清学诊断的参考方法是微量凝集测试(MAT)，其中对患者血清凝集培养的钩端螺旋体属的能力进行表征。遗憾的是，这种方法受限于需要培养用于测定的钩端螺旋体属和所述生物体的异质性。

已进行尝试来鉴别和产生特定的钩端螺旋体属蛋白质或肽，其可用于诊断钩端螺旋体病的传统免疫测定(例如酶免疫测定或侧向流测试)。例如，在欧洲专利号2205625B1(授予Chang)和美国专利申请号2012/0100143(授予Chang)中，公开了许多用于诊断和预防钩端螺旋体病的钩端螺旋体属外膜蛋白(即LP 1454、LP 1118、LP 1939、MCEII、CADF-likel、CADF-like2、CADF-like3、Lp0022、Lpl499、Lp4337、Lp328、L21)和表面蛋白(即LigA和LigB)。类似地，美国专利号7,531,177(授予Nascimento等人)描述了使用表面相关蛋白质LpL53、OMPL55、OMPL16、OMPL31、OMPL15、OMPL20、LpL23、LpL22、OMPL17、OMPL30、OMPL27、OMPL21、OMPL22、MPL17、MPL21、OMPAL21、OMPL63、OMPL14、MPL36、MPL39、MPL40和MPL21作为用作免疫接种物质以及用于钩端螺旋体属的免疫学测定的抗原。然而，以所述方法预选潜在抗原将它们限定为钩端螺旋体属表面蛋白质，所述蛋白质虽然可被个体的免疫系统获取，但可能不包括可用的靶标。