[发明专利]使用HB9调节子使人胚胎干细胞分化为胰腺内分泌细胞的方法

权利要求书

1.一种用于从多能干细胞产生胰腺内分泌细胞的方法，包括以下步骤：

a. 培养多能干细胞；

b. 使所述多能干细胞分化成前肠内胚层细胞；以及

c. 通过用补充有(i)甲状腺激素或(ii)甲状腺激素和ALK5抑制剂两者的培养基处理，使所述前肠内胚层细胞分化成胰腺内分泌细胞，所述甲状腺激素选自三碘甲状腺原氨酸、四碘甲状腺原氨酸、GC-1、DITPA（3,5-二碘甲状腺丙酸）、KB-141、MB07344、T0681、GC-24或它们的混合物，

其中当将前肠内胚层细胞分化为胰腺内分泌细胞的步骤包括将胰腺内胚层/内分泌前体细胞分化为胰腺内分泌细胞时，所述培养基补充有SHH信号转导途径拮抗剂、视黄酸和抗坏血酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述所得细胞的至少百分之十对于NKX6.1、PDX1和HB9呈阳性。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法增强NKX6.1阳性胰腺内胚层前体细胞中HB9的表达。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法降低NKX2.2的表达。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法抑制SOX2和白蛋白的表达。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述甲状腺激素为三碘甲状腺原氨酸。

7.根据权利要求1所述的方法，其中步骤c.包括在补充有三碘甲状腺原氨酸和ALK5抑制剂的培养基中培养。

8.根据权利要求7所述的方法，其中相对于没有用补充有三碘甲状腺原氨酸和ALK5抑制剂的培养基培养的细胞，所述方法增强HB9表达。

9.根据权利要求1所述的方法，其中步骤c.所述的培养基还补充有SANT-1、视黄酸和抗坏血酸。

10.根据权利要求1所述的方法，其中步骤c.还包括通过在补充有三碘甲状腺原氨酸、SHH信号转导途径拮抗剂、视黄酸和抗坏血酸的培养基中培养胰腺内胚层/内分泌前体细胞，形成胰腺内分泌细胞。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述培养基还补充有ALK5抑制剂。

12.一种产生胰腺内胚层/内分泌前体细胞的方法，包括通过用补充有(i)甲状腺激素或(ii)甲状腺激素和ALK5抑制剂两者的培养基处理，使所述前肠内胚层细胞分化成胰腺内胚层/内分泌前体细胞，所述甲状腺激素选自三碘甲状腺原氨酸、四碘甲状腺原氨酸、GC-1、DITPA（3,5-二碘甲状腺丙酸）、KB-141、MB07344、T0681、GC-24或它们的混合物。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述所得细胞的至少百分之十对于NKX6.1、PDX1和HB9呈阳性。

14.根据权利要求12所述的方法，其中所述方法增强NKX6.1阳性胰腺内胚层前体细胞中HB9的表达。

15.根据权利要求12所述的方法，其中所述方法降低NKX2.2的表达。

16.根据权利要求12所述的方法，其中所述方法抑制SOX2和白蛋白的表达。

17.根据权利要求12所述的方法，其中所述甲状腺激素为三碘甲状腺原氨酸。

18.根据权利要求12所述的方法，其中所述方法包括在补充有三碘甲状腺原氨酸和ALK5抑制剂的培养基中培养。