[发明专利]一种优化的眼镜王蛇毒蛋白酶抑制剂基因OH-TCI及其表达方法和应用

权利要求书

1.一种优化的眼镜王蛇毒蛋白酶抑制剂基因OH-TCI，其具有序列表SEQ ID NO:1的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的眼镜王蛇毒蛋白酶抑制剂基因OH-TCI，其特征在于克隆所述基因的特异性引物为：

引物F1：5’-ACGAATTCAAGGTTTTTGAAAGATGTGA-3’；

引物R1：5’-ACGCGGCCGCTTAACCACCACCACCACCAA-3’。

3.根据权利要求1所述的眼镜王蛇毒蛋白酶抑制剂基因OH-TCI，其特征在于在所述OH-TCI基因的5’端加有SmaI酶切位点，3’端加有HandIII酶切位点。

4.权利要求1所述的眼镜王蛇毒蛋白酶抑制剂基因OH-TCI编码产生的蛋白酶抑制剂OH-TCI，其具有序列表SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

5.含有权利要求1所述的眼镜王蛇毒蛋白酶抑制剂基因OH-TCI的重组载体。

6.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于所述重组载体为pUC18-OH-TCI和pET43.1-OH-TCI。

7.权利要求4所述的眼镜王蛇毒蛋白酶抑制剂OH-TCI的表达方法，其特征在于它包括以下步骤：将所述的OH-TCI基因与pUC18-T载体连接后转入大肠杆菌中获得重组质粒pUC18-OH-TCI，以pUC18-OH-TCI为模板，用F1、R1引物进行PCR扩增得到目的基因片段OH-TCI，构建重组质粒pET43.1-OH-TCI并将其转到大肠杆菌BL21中，筛选获得阳性转化子，将阳性转化子接种于液体培养基中，将菌株按2%接种量接入LB培养基中，于37℃，210 r/min摇床培养至OD₆₀₀值达到0.5-0.6时，加IPTG，28℃温度下诱导表达，诱导结束后，离心收集菌体细胞，纯化融合蛋白NusA-OH-TCl，用thrombin酶切融合蛋白得到重组蛋白酶抑制剂rOH-TCl。

8.根据权利要求4所述的眼镜王蛇毒蛋白酶抑制剂OH-TCI在制备治疗急性胰腺炎和减少术中的出血量的药物或保健品中的应用。

9.根据权利要求4所述的眼镜王蛇毒蛋白酶抑制剂OH-TCI在制备治疗急性胰腺炎和减少术中的出血量的药物或保健品中的应用，其特征在于所述眼镜王蛇毒蛋白酶抑制剂OH-TCI具有对胰蛋白酶和糜蛋白酶的抑制活性。