[发明专利]从地榆中分离三种鞣质单体组分的方法

说明书

技术领域

本发明涉及从地榆中分离三种鞣质单体组分的方法，主要涉及没食子酸、3,3′,4′-O-三甲基逆没食子酸-4-O-β-D-木糖苷和3,3’,4’-O-三甲基逆没食子酸的高效液相色谱分离方法。

背景技术

鞣质又称单宁，是存在于植物体内的一类结构比较复杂的多元酚类化合物。它的药理活性除常见的收敛、抗菌消炎、止血、驱虫、止泻、抗多种病原虫感染性疾病外，还表现在人们非常关注的抗肿瘤、抗人类免疫缺陷病毒（HIV）、抗突变、抗脂质过氧化，抗衰老、心血管病、改善肝肾功能、预防应激性胃肠损伤、抗白内障、对重金属盐和生物碱中毒有解毒作用等方面有独到功效。

根据鞣质的化学结构可分为可水解鞣质、缩合鞣质和复合鞣质三大类。其中可水解鞣质是一类由酚酸及其衍生物与葡萄糖或多元醇通过甙键或酯键而形成的化合物。依水解后所得酚酸类的不同，又可分为没食子酸鞣质和逆没食子酸鞣质两类，其中没食子酸与3,3’,4’-O-三甲基逆没食子酸分别为没食子酸鞣质和逆没食子酸鞣质水解产生的两类酚酸及其衍生物，3,3′,4′-O-三甲基逆没食子酸-4-O-β-D-木糖苷为逆没食子酸鞣质，这三种单体组分的结构式分别为：

没食子酸

3,3′,4′-O-三甲基逆没食子酸-4-O-β-D-木糖苷

3,3’,4’-O-三甲基逆没食子酸

见载于文献的分离地榆鞣质类物质的分离方法主要为柱层析技术（王满力，陈桐.柱色谱法分离地榆中的鞣质和皂苷，色谱，1994,12（4）），但该方法产率低、耗时、耗力，且只能将总鞣质和总皂苷分离，而无法获得鞣质单体组分。目前为止尚未公开有高效液相色谱法分离地榆粗提物中三种单体组分的方法，它是一种能够快速、高效分离地榆粗提物中鞣质类组分的分离方法，但应对流动相的条件等进行严格限制，因为鞣质类组分多具有酚羟基结构，容易发生离子化同时洗脱液在浓缩过程中目标化合物易破坏及流动相易残留，所以应对流动相的选择及其条件进行严格限制。

发明内容

本发明提供了从地榆中分离没食子酸、3,3′,4′-O-三甲基逆没食子酸-4-O-β-D-木糖苷、3,3’,4’-O-三甲基逆没食子酸的方法。

本发明提供了从地榆中分离三种鞣质单体组分的方法，所述的三种单体组分分别是没食子酸、3,3′,4′-O-三甲基逆没食子酸-4-O-β-D-木糖苷、3,3’,4’-O-三甲基逆没食子酸，它包括如下操作步骤：

（1）取地榆提取物，制备供试品溶液，所述地榆提取物为地榆总鞣质或地榆的70～95%v/v甲醇提取物；

（2）将供试品溶液注入制备型高效液相色谱仪中，以甲醇-酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，在线监测，分别收集所述三种组分的洗脱液，将各洗脱液减压浓缩、干燥后，得3,3′,4′-O-三甲基逆没食子酸-4-O-β-D-木糖苷、3,3’,4’-O-三甲基逆没食子酸两个纯化样品以及没食子酸粗制品；

（3）取步骤（2）制备的没食子酸粗制品，注入制备型高效液相色谱仪中，以甲醇-酸水溶液为流动相进行洗脱，在线监测，收集没食子酸组分的洗脱液，减压浓缩、干燥，即得没食子酸纯化样品；

其中，步骤（2）采用的色谱条件如下：制备型色谱柱固定相为十八烷基键合硅胶；流动相为甲醇-酸水溶液系统，所述甲醇-酸水溶液系统为：以体积百分比计，甲醇体积浓度为20%～100%的甲醇-酸水溶液的梯度洗脱液；

步骤（3）采用的色谱条件如下：制备型色谱柱固定相为十八烷基键合硅胶；流动相为甲醇-酸水溶液系统，所述甲醇-酸水溶液系统为：以体积百分比计，甲醇体积浓度为5%～100%的甲醇-酸水溶液的梯度洗脱液；

步骤（2）、（3）中，检测波长为210nm、254nm或/和280nm。

进一步地，步骤（1）中所述地榆提取物为地榆的80%v/v甲醇提取物。

进一步地，步骤（2）中，所述甲醇-酸水溶液系统的梯度洗脱条件如下：