[发明专利]贝类中大田软海绵酸的电化学检测方法

权利要求书

1.一种贝类中大田软海绵酸的电化学检测方法，其特征是包括以下步骤:

（1）金电极的预处理：金电极打磨、清洗，再用piranha溶液浸泡，在稀H₂SO₄溶液中于-1.0～1.55V电位下循环扫描，取出后用水冲洗，吹干；

（2）传感器的制备：将步骤（1）处理后的金电极置于含有终浓度分别为1mmol/L硫堇、4mmol/L亚甲基蓝、0.1mol/L氯化钾和pH6.010mmol/L PBS缓冲液的混合溶液中，于+1.5V恒电位下静置，然后用循环伏安法扫描，形成硫堇-亚甲基蓝复合聚合膜；用水充分淋洗金电极后，将其浸于纳米金溶液中，以在金电极上获得纳米金层；取大田软海绵酸单克隆抗体涂覆在金电极表面，室温下反应；滴加牛血清白蛋白溶液以覆盖多余的非特异性位点，即完成传感器的制备；

（3）大田软海绵酸的测定：将不同浓度梯度的大田软海绵酸标准溶液或样品溶液滴加到步骤（2）所制备的传感器表面，反应后，使用电化学工作站进行差示脉冲伏安测量，记录免疫反应前后峰电流值。

2.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于步骤（2）所述纳米金溶液的合成方法为取HAuCl₄溶液加热煮沸，在搅拌回流状态下迅速加入柠檬酸三钠水溶液，继续煮沸，待溶液变为深酒红色时，即完成纳米金溶液的合成，其中HAuCl₄与柠檬酸三钠的质量比为1：3。

3.根据权利要求2所述的电化学检测方法，其特征在于所述的HAuCl₄和柠檬酸三钠的浓度分别为0.01%（重量比）、1%（重量比）。

4.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于步骤（1）所述的金电极用0.05μm铝粉打磨，对打磨后的金电极清洗是依次用超纯水、无水乙醇和超纯水超声清洗。

5.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于步骤（2）所述的循环伏安法扫描的条件是-0.45～0.15V电位、50mV/s速率下扫描25圈。

6.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于步骤（2）所述的大田软海绵酸单克隆抗体溶液浓度为0.1mg/mL，所用的体积为20μL，所述滴加的BSA溶液浓度为0.5%（重量比），体积为20μL。

7.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于步骤（3）中所述样品溶液的制备为称取贝样，加入甲醇水溶液均质提取，离心后定容；取提取液用氮气吹干，用PBS缓冲溶液定容，超声波震荡使残留物充分溶解，溶解液过滤膜后待测。

8.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于步骤（3）中电化学工作站为三电极工作模式，其中所述步骤（2）制备的传感器作为工作电极，铂电极为对电极，饱和甘汞电极为参比电极。

9.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于步骤（3）中所述的差示脉冲伏安法测量的脉冲范围是-0.6～0.6V。

10.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于步骤（3）中所述的大田软海绵酸标准溶液浓度分别为：0.2、2、10、20和100μg/L，滴加大田软海绵酸标准溶液所测电流差值与大田软海绵酸标准溶液浓度的对数呈线性关系，并绘制工作曲线；滴加样品溶液后记录其电流的变化值，根据所得到的工作曲线，计算贝类样品中大田软海绵酸的含量。