[发明专利]一种通过检测EDN3基因拷贝数差异来鉴定乌鸡肤色基因型的试剂盒

权利要求书

1.一种通过检测EDN3基因拷贝数差异来鉴定乌鸡肤色基因型的试剂盒，其特征在于试剂盒包括：

（1）内参基因GAPDH扩增引物；

Forward:5’-CAGCTCCCTCAGCTGATGC-3’；

Reverse:5’-TCCACAATGCCAAAGTTGTC-3’；

（2）目的基因EDN3扩增引物；

Forward:5’-CACGTAACATCCTTCTGACAGC-3’；

Reverse:5’-ATCATAAACAAACAGCCAAATC-3’；

（3）校样品DNA；

（4）荧光定量PCR反应液；

（5）双蒸水。

2.如权利要求1所述的试剂盒中，其特征在于：所述校样品DNA为确定包含单拷贝EDN3基因序列和GAPDH基因序列的鸡基因组DNA。

3.如权利要求1所述的试剂盒中，其特征在于，所述荧光定量PCR反应液成分包含：PCR缓冲液、SYBR Green I染料、MyCl₂、Taq DNA聚合酶、dNTPs。

4.利用权利要求1所述的试剂盒检测EDN3基因拷贝数的方法，其特征在于包括步骤：

（1）以校样品DNA为模板，分别利用目的基因EDN3和内参基因GAPDH引物，进行实时荧光定量PCR扩增，每个反应三个重复，分别记录循环数（Ct1和Ct2）；（2）以待测乌鸡的血液基因组DNA为模板，分别利用目的基因EDN3和内参基因GAPDH引物，进行实时荧光定量PCR扩增，每个反应三个重复，分别记录循环数（Ct3和Ct4）；

（3）利用2^-ΔΔCt法计算得到待测乌鸡的EDN3基因拷贝数，计算公式为：基因拷贝数=2^^{-（（样品的目的基因平均Ct3-内参基因平均Ct4）-（校样品的目的基因平均Ct1-内参基因平均Ct2））}。