[发明专利]定量检测人表皮生长因子受体2的干式荧光免疫试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定全血、血清、血浆的干式荧光免疫试剂盒及其测试方法，尤其是涉及一种定量检测人表皮生长因子受体2的干式荧光免疫试剂盒及检测方法。

背景技术

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，缩写EGFR)是ErbB家族成员之一，具有酪氨酸激酶活性，是一种重要的跨膜受体。EGFR被配体激活后，启动胞内信号传导，经过细胞质中衔接蛋白、酶的级联反应，调节转录因子激活基因的转录，指导细胞迁移、黏附、增殖、分化、凋亡，且与肿瘤的形成和恶化密切相关。

目前乳腺癌已成为女性最常见的恶性肿瘤，也是常见的女性肿瘤死亡原因之一。大约有20％～30％的乳腺癌患者HER-2／neu高表达，HER-2／neu高表达与患者的不良预后密切相关。HER-2／neu基因是人表皮尘长因子家族的第2位成员。定位于染色体17q21，其编码一种分子量为185ku的跨膜糖蛋白，具有酪氨酸激酶活性，结构上分为膜外配体结合域、跨膜区和膜内酪氨酸激酶的活性域。HER-2／neu蛋白的胞外部分可以从细胞的表面脱落至血液中，形成分子量大约为105ku的可溶性蛋白HER-ZECD。HER-ZECD的裂解启动了细胞膜上的受体磷酸化，从而激活了细胞核内her-2并导致基因转录、细胞增殖；或ECD裂解后，截短的细胞内酪氨酸激酶保持信号传导能力，相应的实验结果认为ECD的裂解会使细胞膜上的p95发尘磷酸化，从而导致肿瘤细胞的增殖。

HER-2蛋白通常只在胎儿时期表达，成年以后只在极少数组织内低水平表达。然而有研究表明30％以上的人类肿瘤中存在HER-2基因的扩增／过度表达(如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等)；其中20％-30％的原发性浸润性乳腺癌有HER2基因的扩增／过度表达。研究证实：HER-2的过度表达与肿瘤(尤其是乳腺癌)的发尘和侵袭有关，可提高转移的危险；转染的细胞和动物模型证实，其可改变肿瘤对激素和化疗药物的敏感性。

我国于2006年10月制订发布了《乳腺癌HER2检测指南》。美国临床肿瘤学会(ASCO)和美国病理家学会(CAP)于2006年12月11日联合发布了《乳腺癌HER2检测的ASCO／CAP指南共识》并在2013年再次更新了此指南，强调了检测中易出现误差的环节、内部及外部质量控制和保证程序，旨在使检测的操作程序和对结果判读的标准化，提高HER2检测的可重复性和准确性。因此，定量检测人表皮尘长因子受体2(HER-2)具有非常重要的意义。本发明涉及干式荧光免疫检测HER-2的试剂盒其检测的在提高准确性的前提下，对于易用性方面更有利人表皮生长因子受体2(HER-2)实际操作检测减少人为误差。

发明内容

本发明的目的是提供一种特异性强，灵敏度高，获得检测结果的时间短，操作方式简便，检测结果准确可靠的定量检测人表皮尘长因子受体2(HER-2)的干式荧光免疫试剂盒及检测方法。

本发明的定量检测人表皮生长因子受体2的干式荧光免疫试剂盒，定量检测人表皮尘长因子受体2的干式荧光免疫试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括HER-2试剂卡、HER-2缓冲液和HER-2标准卡；

所述的HER-2试剂卡为一种用于干式免疫层析试验的膜载体，HER-2试剂卡包括带有粘合剂的衬板，衬板上设有相互搭接的样品垫、抗体承载膜和吸水垫，其中，所述的抗体承载膜为硝酸纤维素膜；所述的抗体承载膜上涂有线状或带状的作为质控线的兔抗小鼠2抗和线状或带状的作为检测线的小鼠抗人HER-2的单克隆抗体；所述的HER-2缓冲液含有抗HER-2单克隆抗体与三羟甲基氨基甲烷(TRIS)、MAK33和甲基纤维素；所述的HER-2标准卡中存储有HER-2标准曲线。

本发明的定量检测人表皮尘长因子受体2的干式荧光免疫试剂盒，其中所述的HER-2试剂卡采用如下步骤制成：

1、称取7g三羟甲基氨基甲烷(TRIS)、1g NaN3和6g甲基纤维素于容器中，称取4g吐温20(TWEEN-20)，加适量水使吐温20(TWEEN-20)完全溶解后，倒入上述容器中；

2、用移液器将Proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述容器中，然后在容器中加入800ml纯化水，充分搅拌；

3、加入盐酸或氢氧化钠溶液调节容器中溶液的pH，控制pH在7.95-8.05之间；

4、称取牛血清白蛋白(BSA)3g，四环素0.04g，硫酸新霉素1g，全部倒入上述容器中，充分混匀；