[发明专利]道地丹参的培育方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物新品种的培育方法，特别是一种绿色超级道地丹参的培育方法。 

背景技术

丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）是我国传统医药中应用最早、最广泛的中药之一，是著名的活血化淤药，在临床上被广泛用于治疗冠心病、心绞痛、缺血性中风等疾病。随着我国人口老龄化，心血管疾病成为危害人类健康的主要疾病，发病率逐年上升，对药物需求量增大。目前我国以丹参为原料生产的复方中药有100多种，涉及的企业有100多家，对优质丹参药材的需求量巨大。然而，我国至今还没有一个统一的道地丹参栽培品种。近年来，农业界为迎接第三次绿色革命，继袁隆平的“超级稻”之后又提出培育“绿色超级稻”的奋斗目标。在这种启发下，作者提出培育“绿色超级道地丹参”的奋斗目标。 

实际上，与农业种质资源相比，我国中药种质资源更丰富，对培育绿色超级物种更具有优势。传统中药在我国应用历史悠久，在全国各地分布着一批具有独特功能的药用植物，它们是经过长期的自然选择和人工选择的积累而形成的特殊种群，具有特征性功能基因组，是培育绿色超级道地中药最宝贵的基因库。很多道地中药都是长期生长在极端特殊的自然环境条件下，积累了能抵抗各种外界胁迫能力的基因，因此，尽快的挖掘、保全和利用道地中药材中的特殊功能基因组，不仅对培育绿色超级道地中药有利，对我国中药现代化发展也具有引领作用。 

发明内容

本发明的目的是提供一种绿色超级道地丹参的培育方法，它是依据道地中药丹参本身固有的道地功能基因组和基因，抵抗外来生物及非生物的胁迫，达到增加药材产量，提高主要药物有效成分含量的目标，实现不打农药，不施或少施化肥的目的。 

本发明的目的是提供一种绿色超级道地中药丹参的培育方法包括以下步骤： 

首先是收集全国野生丹参种质资源，建立中国丹参种质资源圃。

第二，从形态学、细胞生物学（染色体）、分子生物学不同层面对我国丹参种质资源进行研究，评选出具有代表性的道地丹参种质资源，并从基因组染色体结构和DNA分子条形码技术对道地丹参进行鉴定。 

第三，将一个具有隐性标记性状的二倍体道地丹参和一个具有显性标记性状的二倍体道地丹参，分别进行人工诱变成同源四倍体（4x，含有4个相同的道地丹参功能基因组）。 

第四，三倍体丹参杂交转育，分别将具有隐性标记性状（如白花）和具有显性标记性状（如紫花）的四倍体丹参，分别与具有相对标记性状的二倍体道地丹参（2x，含有2个相同道地丹参功能基因组）进行有性杂交（4x♀×2x♂或2x♀×4x♂），获得三倍体丹参永久杂种（3x，含有3个相同道地丹参功能基因组）。 

第五，脱毒处理：以三倍体丹参杂交当代种子幼苗茎尖或新生幼叶为外植体，用75％酒精和0.1％升汞进行脱毒处理。 

第六，组培苗克隆增殖：将脱毒处理好的外植体接种在MS＋6BA1.5mg/L培养基上，在光周期14小时/天，光强度3000Lux，室温20—25℃条件下进行光照培养，待接种材料切割面产生丛生芽，转入1/2MS＋6BA1mg/L培养基上，进行克隆增殖。 

第七，瓶苗移栽，待瓶苗新根长1-2公分时，进行瓶苗移栽，移栽前2天先打开瓶盖练苗。 

第八，移栽苗管理，刚移出的苗要半遮光，保持45-55％的湿度，加强管理成活率可达90％以上。 

第九，新品种评比试验，按常规新品种评比试验要求进行。 

第十，药材产量、药物主要有效成分含量测定：根据《中华人民共和国药典》规定，对丹参酮ⅡA、丹酚酸B和隐丹参酮进行测定。 

第十一，绿色超级道地丹参新品种认定：按上述程序，依据得到的丹参药材产量和主要药物有效成分含量，可培育出综和生物学性状好，抗生物及非生物胁迫能力强的绿色超级道地丹参新品种（药村产量和主要药物有效成分含量全面提高50％以上）。 

第十二，绿色超级道地丹参新品种鉴定：通过基因组染色体鉴定，可以确定新培育出来的绿色超级道地丹参是一个具有3个相同基因组的三倍体丹参（2n=3x=24），通过道地丹参亲本标记性状和DNA条形码可以确定被固定的道地丹参功能基因组的来源。