[发明专利]硝基呋喃类药物代谢物的衍生物及高效液相色谱荧光检测

说明书

技术领域

本发明涉及一种硝基呋喃类药物代谢物的制备，尤其涉及一种硝基呋喃代谢物AOZ的制备方法及其利用高效液相色谱荧光方法检测AOZ。 

背景技术

硝基呋喃类抗生素（Nitrofurans）是人工合成的具有5-硝基呋喃基本结构的广谱抗菌药物，该类抗生素对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、某些真菌和原虫均有抑制作用，曾经广泛用于家禽、家畜、水产、蜂等动物传染病的预防与治疗，但是硝基呋喃类药物的副作用已引起人们的高度关注。例如呋喃唑酮对治疗肠炎和痢疾等效果非常显著，而且又比较经济实惠，所以，有些养殖企业把呋喃唑酮作为预防动物腹泻和霍乱等疾病的主要用品，长期使用，使得药物残留在被饲喂动物的肌肉组织与内脏组织中，人在食用这些动物性食品后也会出现类似于药物过敏的症状，重者会出现心动过速、血压升高、胸闷和烦燥等。孕妇在长时间食用这些肉食品后还有可能造成新生儿畸形的风险。由此可见，对呋喃唑酮进行监测是保障人类食品安全的重要组成部分，是保障人类身体健康与生命安全的重要措施。 

硝基呋喃类药物是一种广谱抗生素，对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、真菌和原虫等病原体均有杀灭作用，而硝基呋喃类药物代谢迅速，致使在血浆水平中相应的母体化合物在几分钟至几小时内降解。但其代谢物会以结合态形式在体内残留较长时间，是硝基呋喃类药物的标记残留物。因此硝基呋喃抗生素代谢物可在动物喂食的残留污染食物中和动物肌肉中检测到。 

发明内容

本发明的目的是提供一种硝基呋喃类药物代谢物3-氨基-2-唑烷基酮（AOZ）的制备方法，并建立了AOZ动物源残留量的高效液相色谱荧光测定方法。本方法以2-羟基-1-萘醛为AOZ的荧光衍生试剂，实现对AOZ的定量分析，建立了AOZ的液相色谱-荧光检测方法，该方法灵敏度满足国际上动物源性食品和水产品中AOZ的残留要求，操作方便高效稳定，易于推广，适合工商部门、检验检疫机构及相关产品养殖加工企业对硝基呋喃代谢物AOZ的快速检测。 

本发明正是出于上述目的，通过新的合成方法合成了硝基呋喃类药物代谢物AOZ，并采用高灵敏度、高选择性的荧光衍生试剂柱前衍生、高效液相色谱分离检测AOZ，建立了AOZ的液相色谱-荧光检测方法。本发明通过2-羟基-1-萘甲醛作为衍生试剂进行衍生化，其与AOZ结合后产生较强的荧光。用乙酸乙酯萃取，以乙腈硼酸盐缓冲液为流动相，梯度洗脱，将该代谢产物完全分离并进行测定，建立了一种新型硝基呋喃类抗生素代谢物AOZ的检测方法。 

本发明所述的硝基呋喃代谢物AOZ与衍生试剂2-羟基-1-萘甲醛反应后，光谱性质研究表明生成了较强的荧光化合物，从而实现了对AOZ的液相色谱-荧光检测。 

本发明组合物是由下列用量的原料组成 

甲醇钠        0.1128g       甲  醇                    0.23ml           乙醇肼     1.35ml

碳酸二甲酯 2.53ml         2-羟基-1-萘甲醛     0.344g            乙  醇     25ml。

附图说明

图1为工作曲线座标示意图。

具体实施方式

本发明的制备方法步骤如下 

1、称取甲醇钠0.1128g，量取甲醇0.23ml，乙醇肼1.35ml，加入50ml三口烧瓶中，充分搅拌20min，使甲醇钠充分溶解，烧瓶内为无色透明溶液；

2、加入碳酸二甲酯2.53ml，70℃保温1h，缓慢搅拌升温至75℃，敞口回流蒸出甲醇，回流2h至甲醇蒸馏完毕，结束反应，得到AOZ的合成液；

3、称量0.344g（20mmoL）2-羟基-1-萘甲醛，用25mL乙醇溶解，将此溶液滴加到AOZ合成液中，滴加时要注意速度，约3s一滴，边搅拌边滴加，滤液逐渐变浑浊，溶液为淡黄色，70℃回流2小时，三口烧瓶内上层为淡黄色液体，下层为白色沉淀，趁热过滤后，将淡黄色滤液结晶得到淡黄色晶体，水洗3次，再用无水乙醇洗涤2-3次，最后用无水乙醇重结晶，干燥称重，即得代谢物，质量为0.2815g。