[发明专利]一种区分多重基因检测方案的方法、条形码引物组以及试剂盒条形码系统

说明书

技术领域

本发明涉及到生物基因检测试剂行业中一种通过在检测试剂中添加基因组DNA扩增引物、进行PCR扩增后采用毛细电泳（CE）方法检测这些基因片段（条形码基因）长短和数量的不同组合从而识别多种基因检测试剂盒的方法。

背景技术

基因检测是通过血液、其他体液或细胞对DNA进行检测的技术，此技术可用于鉴定病原体、诊断遗传病、疾病风险的预测、个体化用药指导等等。在基因检测技术中，最常用的有荧光定量PCR（qPCR）、芯片法及PCR毛细电泳法（PCR-CE）多重基因检测。qPCR检测方法采用荧光淬灭及双末端标记技术，针对基因位点设计特异性的探针，可对样品的基因表达谱生物信息进行快速定性和定量分析。qPCR法具有灵敏度高、准确性强的优势，缺点是通量低，不适宜做多位点的检测。芯片法是将数以万计的特定序列的DNA片段（基因探针），有规律地排列固定于支持物上，利用这类芯片与标记的生物样品进行杂交，可对样品的基因表达谱进行定性分析。芯片法具有高通量并行检测的优势，缺点是灵敏度和准确性较低、技术成本昂贵、复杂。PCR-CE法多重基因检测是针对要扩增的基因序列，设计各自的引物且保证扩增后的目的片段大小不同，然后对扩增后的目的片段通过毛细电泳的方法进行分离。此方法可同步检测40余个基因位点及内参基因，具有灵敏度高、准确度强、高通量、低成本的优势，具有广泛的发展前景。

近年来，得益于基因检测技术的不断进步，基因检测服务在我国也得到了长足发展，一些经CFDA认证的qPCR、芯片法及PCR-CE法试剂盒已开始进入临床。未来，随着社会和科学技术的发展，会有更多疾病及个体化用药指导等临床项目可以用基因检测的方法进行预测。但是，基因检测服务在给接受检测的患者带来福利的同时，也给同时做多种试剂盒检测的实验人员带来了分析海量数据的繁重工作。以PCR-CE法多重基因检测为例，目前已开发出几十种多重基因检测方案，正在进入CFDA认证程序。尽管已有专门针对某个检查方案的分析软件，但是如果同时检测多个患者的样品，每个患者又需要检测不同的项目时，实验人员需要首先对检测数据进行分类，然后用不同的软件逐一进行分析，耗时又耗力。因而，基因检测服务市场急需一种区分不同检测试剂盒的“试剂盒条形码系统”，以便实验人员简单、迅速、准确的完成基因检测的数据分析。

目前，国内外还未见到采用毛细电泳检测基因片段大小和数量的不同组合区分PCR-CE多重基因检测方案的方法。本发明为基于PCR-CE法多重基因检测的试剂盒提供了一种轻松辨认多种检测方案的“试剂盒条形码系统”，可使实验人员摆脱分析海量数据的繁重工作，提高了工作效率和准确性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种区分多重基因检测方案的方法，该方法通过在多重基因检测试剂盒试剂中添加一系列条形码引物经PCR扩增后采用毛细电泳方法对这些基因片段（检测基因、内参基因、条形码基因）进行同步分离，之后根据条形码基因的CE片段长短和数量的不同组合，判定实验数据所属的试剂盒并选用相应的方法开始数据分析。此方法可使实验人员摆脱分析海量数据的繁重工作，提高了工作效率和准确性。

本发明所要解决的技术问题还在于提供用于确定多重基因检测方案的条形码引物组，将该引物组与多重基因检测试剂盒中的检测试剂同步PCR扩增后采用毛细电泳方法对这些基因片段（检测基因、内参基因、条形码基因）进行同步分离，所得到的毛细电泳分离片段长短和数量具有不同组合，并且该不同组合与待区分的多重基因检测方案一一对应；因此可以判定实验数据所属的试剂盒并选用相应的方法开始数据分析。

本发明所要解决的技术问题还在于提供试剂盒条形码系统，该系统为基于PCR-CE法多重基因检测的试剂盒提供了一种辨认多种检测方案的条形码引物组；使实验人员摆脱分析海量数据的繁重工作，提高了工作效率和准确性。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为一种区分多重基因检测方案的方法，使用条形码引物与多重基因检测试剂盒检测试剂进行同步PCR扩增，通过毛细电泳检测基因片段的长度和数量不同组合来区分多重基因检测方案；包括以下步骤：

步骤1，选取n个条形码基因标准点，并针对条形码基因标准点的位置设计对应条形码基因标准点的PCR扩增引物作为条形码引物，其中n≥1；其中，所述条形码引物PCR扩增片段毛细电泳分离结果需满足以下条件：所述条形码引物PCR扩增片段在毛细电泳分离结果出现的位置、个数具有不同组合，该位置-个数组合赋予唯一编码值，并且所述编码值与待区分的多重基因检测方案的多重基因检测试剂盒一一对应；