[发明专利]检测禽流感病毒H7N9亚型的RT-LAMP试剂盒有效
| 申请号： | 201410015168.X | 申请日： | 2014-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN103740863A | 公开（公告）日： | 2014-04-23 |
| 发明（设计）人： | 廖明;李红梅;亓文宝;黄丽红;李华楠;石磊;唐大运 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学;广州迪澳生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京永瑞专利代理事务所(普通合伙) 11450 | 代理人： | 张庆敏 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 禽流感 病毒 h7n9 rt lamp 试剂盒 | ||
1.一种用于检测禽流感病毒H7N9亚型的特异性引物组合，其特征在于，包括以下6对引物：检测HA基因的1对外引物、1对内引物和1对环引物，检测NA基因的1对外引物、1对内引物和1对环引物，其核苷酸序列分别为：
2.权利要求1所述的特异性引物组合在制备禽流感病毒H7N9亚型的检测试剂盒或检测试剂中的应用。
3.一种含有权利要求1所述特异性引物组合的检测试剂。
4.一种含有权利要求1所述特异性引物组合的禽流感病毒H7N9亚型RT-LAMP检测试剂盒。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包含逆转录酶；DNA聚合酶；RT-LAMP反应液；阳性对照和阴性对照；所述RT-LAMP反应液含有：10mM dNTP、10×ThermoPol反应缓冲液、150mM MgSO4水溶液，三者的体积比是8：5：2。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为含有AIV-H7N9HA基因片段的T载体克隆和NA基因片段的T载体克隆，阴性对照为DEPC处理水。
7.如权利要求4-6任一所述的试剂盒，其特征在于，还包含染色剂SYBR Green I。
8.如权利要求4-6任一所述的试剂盒，其特征在于，检测HA基因的25μL RT-LAMP检测体系的具体配置为：HA-F3 0.2μM，HA-B30.2μM，HA-FIP 1.6μM，HA-BIP 1.6μM，HA-LF 0.8μM，HA-LB 0.8μM，RT-LAMP反应液12.5μl，逆转录酶1U，DNA聚合酶8U，待检RNA1～100ng，用DEPC处理水补齐到25μl；
检测NA基因的25μL RT-LAMP检测体系的具体配置为：NA-F30.2μM，NA-B3 0.2μM，NA-FIP 1.6μM，NA-BIP 1.6μM，NA-LF 0.8μM，NA-LB 0.8μM，RT-LAMP反应液12.5μl，逆转录酶1U，DNA聚合酶8U，待检RNA1～100ng，用DEPC处理水补齐到25μl。
9.如权利要求4-7任一所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒的检测HA基因和NA基因的工作条件均为：63-65℃反应60-90min，80℃2min，然后终止反应，通过浊度仪实时判读反应管中的浊度变化。
10.如权利要求4-7任一所述的试剂盒，其特征在于，还包括在配置RT-LAMP检测体系时，在PCR管盖内壁加1μl 1000×SYBR Green I，通过颜色变化判断结果。
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