[发明专利]一种烟草疫霉菌LAMP引物及其快速检测方法有效
| 申请号： | 201410017199.9 | 申请日： | 2014-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN103773865A | 公开（公告）日： | 2014-05-07 |
| 发明（设计）人： | 陈庆河;李本金;刘裴清;谢世勇;翁启勇 | 申请（专利权）人： | 福建省农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350013 福建省福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 烟草 霉菌 lamp 引物 及其 快速 检测 方法 | ||
1.一种烟草疫霉菌的LAMP引物，其特征在于：所述LAMP引物为：
F3: AAATCACGTGTGTGTCTGTAGT；
B3: ACAGGCGTATCTGTAAATCAGTG ；
FIP: CCGTCACGTCGTACACCACAATA-CGTTTCCGCACGATCACTAG ；
BIP: TGTGAAACAGTGGCTGCATGAGA-CACTCAGCTCTTTTCCTTGGA。
2.一种如权利要求1所述的烟草疫霉菌的LAMP引物的检测方法，其特征在于：利用所述的LAMP引物进行LAMP反应， 25μl反应体系中F3与B3各0.2-0.25μM，FIP与BIP各1.5-1.7μM，20mM Tris-HCl，10mM (NH4)2SO4，10mM KCl，8mM MgSO4，0.1wt.% 吐温-20，0.8M 甜菜碱，1.4 mM dNTPs，8U Bst DNA 聚合酶大片段，10-50ng DNA模板，不足部分用无菌双蒸水补足。
3.根据权利要求2所述的烟草疫霉菌的LAMP引物的检测方法，其特征在于：所述LAMP反应条件为在60-65℃温育30-90 min，80℃保温5-10min。
4.根据权利要求2所述的烟草疫霉菌的LAMP引物的检测方法，其特征在于：在LAMP反应的扩增产物中加入1μl显色剂，所述显色剂为SYBR greenⅠ，显色结果观察到绿色荧光判断为阳性，橙色判断为阴性；或取2μl扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测，如出现梯形条带判断为阳性，没有出现则判断为阴性。
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