[发明专利]贝壳杉烷型二萜的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及化学物的分离纯化方法，尤其涉及一种贝壳杉烷型二萜的分离纯化方法。

背景技术

大孔吸附树脂是一种具有大孔网状结构的高分子吸附剂，骨架类型为苯乙烯、丙烯酸酯、丙烯腈、异丁烯等，交联剂为二乙烯苯等，致孔剂为甲苯、石蜡、溶剂汽油、煤油、碳醇、聚乙烯醇等，分散剂为明胶等。大孔吸附树脂的工作原理在于其吸附性和分子筛性。大孔树脂的吸附作用来自于介质的表面吸附、表面电性或形成氢键等。大孔吸附树脂色谱法在新药研究中的应用，主要用于天然产物各成分的粗分离。

硅胶层析法的分离原理是根据化合物在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下，易被硅胶吸附的是极性较大的成分，而无极性或极性较弱的成分难以被吸附。硅胶柱层析分离的过程是一个吸附---解吸---再吸附---再解吸的过程。极性小的化合物用乙酸乙酯、石油醚等弱极性或无极性有机溶剂洗脱；中等极性的化合物可用二氯甲烷、氯仿等中等极性的溶剂洗脱；极性大的化合物用甲醇、水、正丁醇、醋酸等极性溶剂洗脱。

贝壳杉烷是一类含刚性四环骨架的二萜，主要存在于绿色植物的茎叶中。自然界发现的贝壳杉烷衍生物种类繁多，大多数具有较强的生物活性。贝壳杉烷衍生物的生物活性包括调节植物生长、抗微生物、抗炎、细胞毒以及抗肿瘤等作用，引起科研人员的重视。

植物半边旗的全草经有机溶剂提取的总二萜粗品中含有两种贝壳杉烷型二萜；11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19-酸和11α-羟基-15-氧-16(R)甲基-对映贝壳杉烷-19-酸，分别简称5F和4F，其化学结构如图1所示，两者结构相近，是分离纯化的难点。

发明内容

本发明的目的，就是为了提供一种贝壳杉烷型二萜的分离纯化方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：一种贝壳杉烷型二萜的分离纯化方法，包括以下步骤：

A、用无水乙醇溶解总二萜混合物粗品，得到溶解液；

B、将步骤A的溶解液加入大孔树脂柱，利用不同浓度的乙醇梯度洗脱；

C、识别收集含目标物的洗脱液，减压浓缩干燥，得到11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19-酸粗品；

D、将步骤C所得11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19-酸粗品用混合有机溶剂溶解，得到溶解液；

E、将步骤D的溶解液加入硅胶柱，利用混合有机溶剂阶段洗脱；

F、识别收集含目标物的洗脱液，减压蒸馏得到高纯度的11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19-酸。

步骤A中所述溶解液用水调节到其中的乙醇浓度为30％。

步骤B中所述大孔树脂为D101型树脂，所述不同浓度的乙醇的浓度分别为35％、45％、55％和65％，洗脱液用量为6倍柱体积。

步骤C中所述含目标物的洗脱液是用浓度为45％的乙醇洗脱的洗脱液，减压浓缩干燥的温度小于60℃。

步骤D中所述混合有机溶剂为石油醚与丙酮的混合物，石油醚与丙酮的体积比为10∶1。

步骤E中所述混合有机溶剂为石油醚、丙酮与醋酸的混合物，石油醚、丙酮与醋酸的体积比为7∶3∶0.1，洗脱液用量为20倍柱体积。

本发明根据二萜化合物的结构特征，经大孔树脂吸附，采用不同浓度的乙醇阶段洗脱，初步分离得到半边旗5F粗品，作为硅胶柱层析纯化的原料，通过硅胶柱分离得到高纯度的5F产物，从而建立了两种二萜化合物的分离纯化方法。

本发明采用大孔树脂分离结合硅胶柱纯化的方法，得到高纯度化合物，该方法操作简便、成本低廉，适合于批量放大生产。

附图说明

图1是两种贝壳杉烷型二萜的化学结构示意图；

图2是不同阶段纯化产物的TLC检测结果。

具体实施方式

实施例1：半边旗二萜化合物5F的分离纯化

称取粗品200克，加20倍无水乙醇溶解，加水到乙醇含量为30％，上大孔树脂柱分离，依次用35％、45％、55％、65％的乙醇洗脱，收集45％的洗脱液，减压蒸干得到类白色粉末，即半边旗5F粗粉。

柱层析用硅胶在烘箱中活化2小时，干燥器中冷却到室温，用流动相石油醚／丙酮(10∶1)充分浸泡，超声脱气，湿法装柱，自然沉降，用流动相洗出硅胶中的杂质并平衡层析柱。半边旗二萜混合物粉末用流动相溶解配制成进料液，进样后以洗脱液石油醚／丙酮／醋酸(7∶3∶.01)洗脱，洗脱液流速为1mL／min，接收量10mL／瓶。

实施例2半边旗二萜化合物5F的检测

收集液检测采用TLC薄板层析，用20％硫酸乙醇显色，TLC检测结果如图2所示。