[发明专利]用于诊断多囊卵巢综合征的联合标志物、试剂盒和系统

权利要求书

1.联合标志物在制备用于诊断受试者中的多囊卵巢综合征的试剂盒中的用途，其中所述联合标志物包括油酸、硬脂酸、二十烷三烯酸、硫化脱氢表雄酮、糖基化苯丙氨酸和尿苷。

2.一种检测受试者中的多囊卵巢综合征的试剂盒，所述试剂盒包括：

(1)标准品：包括油酸、硬脂酸、二十烷三烯酸、鹅脱氧胆酸、苯丙氨酸和尿苷，所述标准品分别用于绘制对应的血清代谢物油酸、硬脂酸、二十烷三烯酸、硫化脱氢表雄酮、糖基化苯丙氨酸和尿苷的定性和定量标准曲线；

(2)用于预处理来自受试者的血清样品的提取液：包含内标D5-苯丙氨酸、D4-鹅脱氧胆酸、D3-棕榈酸和D3-硬脂酸的乙腈溶液；和

(3)用于洗脱色谱柱的洗脱液。

3.权利要求2所述的试剂盒，其中所述用于洗脱色谱柱的洗脱液是用于洗脱waters T3色谱柱的洗脱液。

4.权利要求3所述的试剂盒，其中所述洗脱液包括：

流动相A：6.5mM的碳酸氢铵水溶液，和

流动相B：6.5mM的碳酸氢铵甲醇水溶液，其中甲醇：水=95∶5，v/v。

5.权利要求2所述的试剂盒，其中所述受试者为女性受试者，所述血清样品为在自然月经周期或孕激素撤退第3-5天或双侧卵巢均无优势卵泡时采集并分离的血清样品。

6.一种计算受试者的血清样品中的联合标志物变量的方法，其中所述联合标志物包括油酸、硬脂酸、二十烷三烯酸、硫化脱氢表雄酮、糖基化苯丙氨酸和尿苷，所述方法包括下述步骤：

(1)利用油酸、硬脂酸、二十烷三烯酸、鹅脱氧胆酸、苯丙氨酸和尿苷作为标准品，加入内标D5-苯丙氨酸、D4-鹅脱氧胆酸、D3-棕榈酸和D3-硬脂酸，分别绘制相对应的血清代谢物油酸、硬脂酸、二十烷三烯酸、硫化脱氢表雄酮、糖基化苯丙氨酸和尿苷的定量标准曲线；

(2)用提取液预处理来自受试者的血清样品，其中所述提取液为包含内标D5-苯丙氨酸、D4-鹅脱氧胆酸、D3-棕榈酸和D3-硬脂酸的乙腈溶液；沉淀血清样品中的蛋白，将上清液冷冻干燥，然后用乙腈：水=1∶4v/v复溶，上样到色谱柱，洗脱，记录所述血清样品中的油酸、硬脂酸、二十烷三烯酸、硫化脱氢表雄酮、糖基化苯丙氨酸及尿苷的洗脱峰强度；和

(3)根据步骤(1)的定量标准曲线和步骤(2)的洗脱峰强度，计算所述受试者的血清样品中的油酸、硬脂酸、二十烷三烯酸、硫化脱氢表雄酮、糖基化苯丙氨酸及尿苷的浓度，并计算所述受试者的血清样品中油酸和硬脂酸的浓度比值；最后基于二元逻辑回归方程计算联合标志物变量。

7.权利要求6所述的方法，其中所述受试者为女性受试者，所述血清样品为在自然月经周期或孕激素撤退第3-5天或双侧卵巢均无优势卵泡时采集并分离的血清样品。

8.一种计算受试者的血清样品中的联合标志物变量的系统，其中所述联合标志物包括油酸、硬脂酸、二十烷三烯酸、硫化脱氢表雄酮、糖基化苯丙氨酸和尿苷，所述系统包括：

(1)绘制定量标准曲线的模块，所述模块基于利用油酸、硬脂酸、二十烷三烯酸、鹅脱氧胆酸、苯丙氨酸和尿苷作为标准品，加入内标D5-苯丙氨酸、D4-鹅脱氧胆酸、D3-棕榈酸和D3-硬脂酸获得的数据，分别绘制相对应的血清代谢物油酸、硬脂酸、二十烷三烯酸、硫化脱氢表雄酮、糖基化苯丙氨酸和尿苷的定量标准曲线；

(2)分离装置，所述分离装置提取并洗脱来自所述受试者的血清样品中的油酸、硬脂酸、二十烷三烯酸、硫化脱氢表雄酮、糖基化苯丙氨酸及尿苷并记录各自洗脱峰强度；

(3)计算模块，所述计算模块基于所述绘制定量标准曲线的模块绘制的定量标准曲线和所述分离装置记录的洗脱峰强度计算所述血清样品中的油酸、硬脂酸、二十烷三烯酸、硫化脱氢表雄酮、糖基化苯丙氨酸及尿苷的浓度，并计算所述血清样品中油酸和硬脂酸的浓度比值；和

(4)计算所述联合标志变量的模块，所述计算所述联合标志变量的模块利用所述计算模块计算的二十烷三烯酸、硫化脱氢表雄酮、糖基化苯丙氨酸及尿苷的浓度值和油酸和硬脂酸的浓度比值基于二元逻辑回归方程计算所述联合标志物变量。

9.权利要求8所述的系统，其中所述受试者为女性受试者，所述血清样品为在自然月经周期或孕激素撤退第3-5天或双侧卵巢均无优势卵泡时采集并分离的血清样品。

10.权利要求8所述的系统，其中所述分离装置包括waters T3色谱柱和超高效液相色谱串联质谱仪。