[发明专利]沼水蛙抗菌肽及其制备与应用

权利要求书

1.一种沼水蛙抗菌肽，其特征在于：所述抗菌肽氨基酸序列为SEQ ID NO.1 ：FLGALFKVASKLVPAAIRSISKK。

2.根据权利要求1所述的一种沼水蛙抗菌肽，其特征在于：所述抗菌肽能够抑制常见细菌生长，包括革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。

3.根据权利要求1所述的一种沼水蛙抗菌肽，其特征在于：所述抗菌肽在模拟细胞膜环境下会折叠成两亲性的α-螺旋结构。

4.根据权利要求1所述的一种沼水蛙抗菌肽，其特征在于：抗菌肽衍生物为所述抗菌肽的一个或者几个氨基酸被取代，或者环化，或者L-型氨基酸变为D-型氨基酸，或者缺失，或者加入而得到同等功能的多肽。

5.根据权利要求1所述的一种沼水蛙抗菌肽，其特征在于：一种与所述抗菌肽SEQ ID NO.1具有80%及以上同源性的多肽，该多肽功能与SEQ ID NO.1相同或相似。

6.根据权利要求1所述的一种沼水蛙抗菌肽，其特征在于：一种抗菌肽序列的前端，中端或者末端包含权利要求1所述抗菌肽，该多肽与权利要求1所述抗菌肽功能相同或者相似。

7.一种如权利要求1所述的一种沼水蛙抗菌肽的制备方法，其特征在于：所述抗菌肽可以从天然沼水蛙皮肤分泌物分离纯化或人工合成方法得到。

8.根据权利要求7所述的一种沼水蛙抗菌肽的制备方法，其特征在于：具体制备步骤为：

1）提取皮肤分泌物：捕捉福建地区野生沼水蛙，充分洗净，采用市售9V直流电池对沼水蛙耳后腺及背部腺体发达部分皮肤适度电刺激，待实验个体皮肤表面产生大量分泌物，用体积比为0.05%三氟乙酸的去离子水冲洗分泌物，收集冲洗液冷冻干燥，即为沼水蛙皮肤分泌物粗提物；

2）分离纯化：取沼水蛙皮肤分泌物粗提物利用Sephadex G-50凝胶色谱进行分离，以去离子水为洗脱液，流速0.3 mL/min，测量洗脱组分214 nm波长处的吸光值。收集具有最佳抗菌活性的峰，利用反相高效液相色谱进一步分离。反相高效液相色谱的洗脱梯度为0～5min，0～20% v/v乙腈；5～40min，20～70% v/v乙腈；流速为1.0 mL/min，检测波长214 nm，收集体积分数为50%乙腈浓度的洗脱峰，冷冻干燥即得所述抗菌肽。

9.一种如权利要求1所述的一种沼水蛙抗菌肽的应用于抗菌类药物的研制与开发。