[发明专利]人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种狂犬病疫苗及其制备方法，具体涉及一种人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗及其制备方法。

背景技术

狂犬病疫苗是由狂犬病病毒在宿主细胞上扩增培养，然后经灭活、纯化、冻干等步骤后得到的用于预防或治疗对狂犬病毒有高危接触者或已感染狂犬病毒者的疫苗。目前作为制备狂犬病疫苗的宿主细胞可以是最早开始使用的动物细胞如Vero细胞，还可以是人二倍体细胞，前述两种宿主细胞中，人二倍体细胞来源于人体组织，是目前已经公知的可用于制备狂犬病疫苗的宿主细胞；人二倍体细胞目前经过数十年的研究，其生长特性，遗传稳定性、外源因子污染检查、致肿瘤阴性等特征已被充分验证，另外，人二倍体细胞来源于人体组织，其用于制备疫苗时其内的残余成分不会成为超敏反应原，因此，其所制得的疫苗的安全性较高。

利用人二倍体细胞作为宿主细胞扩增培养而获得的狂犬病毒原液需要经过灭活、纯化、冻干等工艺步骤后才可作为用于人体的狂犬病疫苗成品。前述步骤中，无论是灭活、纯化，或者是冻干工艺均会对最后所获得的狂犬病疫苗的性质有一定的影响。

扩增培养后的狂犬病毒原液经灭活和纯化后得到的狂犬病毒半成品在冻干过程中，由于冻干方法、冻干工艺参数的区别常常导致所获得狂犬病疫苗在物理形态、残余水分含量、溶解性等性能上具有差异，从而导致了狂犬病疫苗的效价稳定性有差异。

另外，狂犬病毒半成品在冻干过程中，为了避免效价稳定性的降低，一般均为采用在狂犬病毒半成品中加入一定比例的稳定剂，如人血白蛋白；目前在狂犬病毒半成品每mL中所加入的人血白蛋白的量一般为1g或3g，或者是采用更多的加入量，如10g；由于人血白蛋白成本价格较高，加入过多则产品成本偏高，若加入过少则产品的效价稳定性则较差。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗，其热稳定性和效价稳定性相对于用现有的冻干工艺制备出的人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗而言具有明显的提高。

为解决以上技术问题，本发明的技术方案是采用一种人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗，所述人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗在物理形态上具有质量分数为92.0%以上的疏松体，并且所述人二倍体细胞培养的狂犬病毒疫苗的溶解时间为95s-99s。

优选的，所述疏松体为乳白色。

优选的，所述人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗包括有将人二倍体细胞作为宿主细胞接种狂犬病毒后扩增培养、收获病毒原液并灭活、纯化得病毒半成品，所述病毒半成品经冻干获得所述人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗，所述冻干步骤如下：

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真空阶段和干燥阶段；所述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥；所述逐步升温干燥所设置的温度梯度为从-40.0℃到-35.0℃，温度间隔为1℃和/或0.5℃；所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时间为200-260min。

优选的，所述冻干步骤如下：

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真空阶段和干燥阶段；所述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥；所述逐步升温干燥中的温度梯度分别设置为-40.0℃、-39.0℃、-38.5℃、-38.0℃、-37.5℃、-37.0℃、-36.5℃、-36.0℃、-35.0℃；所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时间为240min。

本发明与现有技术相比，其详细说明如下：

本发明所采用的技术方案为所述人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗在物理形态上具有质量分数为92.0%以上的疏松体，并且所述人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗的溶解时间为95s-99s。

本发明所述人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗为了解决现有的利用同样的宿主细胞培养出的狂犬病疫苗在效价稳定性上的不足之处，主要采用了将狂犬病疫苗产品的物理形态进行调整，将狂犬病疫苗产品在物理形态上所具有疏松体的含量进行提高，当其含量达到92.0%以上，同时所得疫苗产品的溶解时间为95s-99s时，其所得到的狂犬病疫苗的效价稳定性可以得到明显的提高；下文中分别通过热稳定性试验和效价稳定性试验来说明，具体可详见实施例部分。

本发明所述人二倍体细胞可以是现有常用的任一种人二倍体细胞株系，包括有WI-38、KMB17、IMR-90、MRC-5、2BS等。

进一步的，本发明所述人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗可优选为以下制备方法所得：包括有将人二倍体细胞作为宿主细胞接种狂犬病毒后扩增培养、收获病毒原液并灭活、纯化得病毒半成品，所述病毒半成品经冻干获得所述人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗，所述冻干步骤如下：