[发明专利]一种提高葡萄糖脱氢酶释放量的方法

权利要求书

1.一种提高葡萄糖脱氢酶释放量的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

A、选取用于生产葡萄糖脱氢酶的重组大肠杆菌菌液，再加入非离子型表面活性剂，控制温度在20℃～45℃的条件下进行处理；

B、经过非离子型表面活性剂处理后，再用均质机在500～700MPa压力条件下进行破碎细胞处理，得到含葡萄糖脱氢酶的细胞破碎液。

2.根据权利要求1所述提高葡萄糖脱氢酶释放量的方法，其特征在于，步骤A所述非离子型表面活性剂选自吐温40、吐温20、吐温80或曲拉通X-100。

3.根据权利要求1或2所述提高葡萄糖脱氢酶释放量的方法，其特征在于，所述非离子型表面活性剂为曲拉通X-100，且所述曲拉通X-100的质量浓度为0.5%～5.0%。

4.根据权利要求3所述提高葡萄糖脱氢酶释放量的方法，其特征在于，所述曲拉通X-100的质量浓度为1.5%～2.5%。

5.根据权利要求1或2所述提高葡萄糖脱氢酶释放量的方法，其特征在于，步骤A中所述处理的温度为25℃～37℃。

6.根据权利要求3所述提高葡萄糖脱氢酶释放量的方法，其特征在于，步骤B所述处理的时间为10～30分钟。

7.根据权利要求1或2所述提高葡萄糖脱氢酶释放量的方法，其特征在于，步骤A所述用于生产葡萄糖脱氢酶的重组大肠杆菌菌液具体为：

选取含有葡萄糖脱氢酶的大肠杆菌进行活化、种子培养和发酵诱导培养，得到用于生产葡萄糖脱氢酶的重组大肠杆菌菌液重组大肠杆菌菌液。

8.根据权利要7所述提高葡萄糖脱氢酶释放量的方法，其特征在于，步骤A所述用于生产葡萄糖脱氢酶的重组大肠杆菌菌液的具体制备方法为：

a、活化：将含有葡萄糖脱氢酶的大肠杆菌菌种接种至固体LB斜面培养基中，控制温度在35℃～40℃的条件下进行活化培养；

b、种子培养：从固体LB斜面中挑取菌落接种至种子培养基中，控制温度在35℃～40℃条件下培养至OD值为1.5～4的种子液；

c、发酵培养：将OD值为1.5～4的种子液在无菌条件下接种至IPTG诱导初始培养基中进行初始发酵培养，当OD值为26时，添加IPTG，使培养液中的IPTG浓度达到1.0～1.5mol/L，并控制体系中的溶氧和pH值，在添加IPTG培养4～5小时之后，再加入乳糖进行培养，得到用于生产葡萄糖脱氢酶的重组大肠杆菌菌液。

9.根据权利要求7所述提高葡萄糖脱氢酶释放量的方法，其特征在于，所述含有葡萄糖脱氢酶的大肠杆菌为大肠杆菌BL-21。

10.根据权利要求8的所述提高葡萄糖脱氢酶释放量的方法，其特征在于，步骤c所述的IPTG诱导初始培养基包括以下浓度的成分：

蛋白胨：10～14g/L；硫酸铵：2.0～3.0g/L；酵母膏：6.0～10g/L；柠檬酸铁铵：0.2～0.4g/L；氯化钠：2.0～4.0g/L；甘油8.0～12g/L；泡敌：1.0～3.0g/L；1000×微量元素浓缩液：0.05～0.15mL/L；十二水合磷酸一氢钠：8.8～9.0g/L：磷酸二氢钾：3.2～3.6g/L；葡萄糖：0.3～0.7g/L；硫酸镁：0.02～0.03g/L；硫酸卡那霉素：12～18μg/L。