[发明专利]一种菌根化石斛苗茶树仿野生栽培方法

说明书

技术领域

本发明属于种植技术领域，具体涉及一种菌根化石斛苗茶树仿野生栽培方法。

背景技术

石斛为我国传统名贵中药材，我国历版药典均有记载。中药石斛的原植物为兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium Sw.)多年生草本植物。多年以来，商品石斛主要依靠野生药用石斛资源，随着药用石斛开发利用的不断深入和国内外需求量的逐年增加，我国野生药用石斛资源遭到了严重破坏，有些地区甚至面临枯竭。近年来，人们逐渐开始对石斛的野生植物进行家种栽培、高产栽培技术等加以实践。

当前的人工栽培中，繁殖主要依靠分株繁殖和扦插繁殖，但该方法繁殖系数低，既不经济，又限制了石斛的产量潜力，不便栽植管理推广，因而扩大种植面积受到抑制。许多地方采用了组培繁殖方法以快速获得大量幼苗；由于石斛在组培繁殖时是在人工环境中进行的，其药用价值远不及野生的铁皮石斛，因此很有必要采用野生的方法种植铁皮石斛。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对纯人工种植石斛所具有的药用价值的不足，提供一种仿野生种植方法，以提高石斛的药用价值，提高经济效益。

本发明通过下述技术方案实现的。

一种菌根化石斛苗茶树仿野生栽培方法，其特征包括以下步骤：

步骤1：菌根真菌的发酵培养

A.选取野生石斛的新鲜营养根，将根段浸入1％次氯酸钙溶液中1-10min进行表面灭菌，然后用无菌水冲洗3-5次；将根段切成0.5-3mm长的小段，放置在分离培养基上，20-30℃下暗培养，待菌丝自根段中长成菌落后，挑取菌丝在分离培养基上进行培养纯化后转接于固体发酵培养基中，于2-30℃恒温培养5-50天后在菌落边缘打孔成菌片，直接使用或作为菌根真菌种子菌种进一步接入液体或固体发酵培养基进行放大培养；

所述的分离培养基为：葡萄糖1-30g／L、蛋白胨1-10g／L、链霉素0.001-1g／L、研磨过的缺齿蓑藓1-30g/L、干酪素水解物0.01-10g／L、琼脂1-30gg/L，pH值4-9；

所述的发酵培养基为：马铃薯20-300g／L、葡萄糖2-300g／L、缺齿蓑藓研磨物20-300g／L、蛋白胨1-30g／L、硫酸铵0.1-20g／L、磷酸二氢钾0.1-20g/L、硫酸镁0.1-20g/L、氯化锰0.1-20g/L，琼脂1-30g／L，pH值4-9；

B.液体发酵培养

将菌根真菌种子菌种接入发酵培养基用三角瓶或其他容器振荡或发酵罐通气暗培养，培养结束后直接使用或用匀浆机打碎培养产物备用；发酵条件为：接种量6％-18％，温度20-30℃，培养时间5-90h；

C.固体发酵培养

将菌根真菌种子菌种接种至固体发酵培养基中，接种量6％-18％，温度20-30℃下发酵培养2-50天，待菌丝50％～100％长满培养基时获得菌根真菌固体菌块；

步骤2：石斛组培苗的培养

A.原球茎诱导及继代增殖培养：采集野生石斛属带腋芽的幼茎，用75％的酒精浸泡50±10秒后，再用浓度为1g／L的氯化汞溶液浸泡1-10分钟，无菌水冲洗3-5遍，切取0.1-3cm茎段接种到1／2MS+6-BA0.01-10mg／L+NAA0.01-10mg／L+研磨过的缺齿蓑藓1-200g／L+马铃薯汁1-200g／L+蔗糖2-20g/L的琼脂培养基上；pH为4-9，在20-30℃，光照强度为1500-2500Lx，光照12h／d，培养10-90天，腋芽处可抽生新枝呈丛芽状，新枝可切割重复培养，直至长成完整试管苗供移栽；或将诱导出的原球茎接种到继代增殖液体培养基和继代增殖固体培养基上交替培养，增殖培养10-60天为一个继代周期，培养温度20-30℃，光强度1500-4000Lx，光照10-14小时／天；

所述继代增殖液体培养基为：1／2MS+6-BA0.1-10mg／L+NAA0.1-10mg／L+马铃薯煮汁2-200g／L+缺齿蓑藓研磨物1-200g/L+活性炭0.1-10g／L+蔗糖2-50g／L，pH4-9；

所述继代增殖固体培养基为：1／2MS+6-BA0.1-10mg／L+NAA0.1-10mg／L+马铃薯汁2-200g／L+缺齿蓑藓研磨物1-200g／L+活性炭0.1-10g/L+蔗糖2-50g/L+琼脂1-30g／L，pH4-9；