[发明专利]一种注射用乌头提取物的制备方法

说明书

【技术领域】

本发明属于医药技术领域，可用于一种注射用乌头提取物的制备方法。

【背景技术】

乌头(Aconitum carmichaeli Dibx)属于毛茛科乌头属植物，目前世界上已发现超过300个品类，我国是主要的产区之一。乌头具有祛风除湿，胜湿止痛的功效，临床上主要用于抗炎、镇痛、镇静、解热、免疫抑制、抗肿瘤作用及强心、降血压、扩张血管等作用，具有较高的药理活性和药用价值。

乌头注射剂是从乌头中提取出的总生物碱制剂，临床上主要用于癌症晚期的镇痛、抗炎和抗癌作用，给药方式主要有肌肉注射和静脉注射。传统的肌肉注射通过皮下血管吸收，起效慢，而且很容易造成局部组织痉挛；此外，肌肉注射的剂量小，需多次给药，给病人带来痛苦的同时药效也不显著，为临床应用带来巨大的局限性，所以，乌头注射剂正在向静脉注射的方向发展。

乌头的有效成分为二萜类生物碱，主要包括胺醇型生物碱，单酯型生物碱，双酯型生物碱和脂肪族生物碱，其中双酯型生物碱的含量最高，毒性也最大，在制备注射剂的过程中需要经过水解炮制，去除毒性。《中国药典》对炮制后的乌头中双酯型生物碱的含量有明确的规定，不得超过0.04％，以保证用药的安全性。

乌头注射剂传统的制备工艺比较简单，采用乙醇冷浸提取，药渣水煮，合并提取液后直接酸性条件下水煮炮制，活性炭脱色后再水煮的方法。此制备工艺没有明确的除杂过程，得到的乌头提取物中杂质含量较高，颜色较深；此外，该工艺在酸性条件下炮制效率不高，产物中还有部分毒性成分双酯型生物碱残留。因此，可以针对乌头药材建立一种乌头提取物的制备工艺，该工艺有效地去除了色素等杂质，提高了药效成分单酯型生物碱的含量，控制了毒性成分双酯型生物碱的含量，再经过适当的药效学和毒性评价，可作用乌头注射剂的原料，目标是改善乌头注射剂的安全性和稳定性。

【发明内容】

本发明的目的在于克服现有技术的不足，开发了一套完整的注射用乌头提取物的制备方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种注射用乌头提取物的制备方法，其具体步骤为：

(1)超声提取：将乌头药材粉碎后加入乙醇水溶液超声提取两次，合并两次提取液，蒸至无醇味；

所述的乙醇水溶液的体积浓度为75～100％，用量为6～10倍量(w∶v)，w∶v是指乌头药材的质量和乙醇水溶液的体积比；

所述的提取时间为每次1～3小时；

(2)有机相萃取：直接向步骤(1)所得的提取液中加水补充至固体充分溶解，滴加氨水调碱性；加入有机溶剂萃取，合并有机相溶液蒸干；

所述的碱性条件为pH8～10，有机溶剂为乙酸乙酯，环己烷，二氯甲烷等弱极性溶剂；

所述的有机相与水相体积比为1∶1～1∶1.5，萃取2～4次；

(3)反相色谱纯化：将步骤(2)所得的固体残余物加入有机溶剂和水的混合溶液重溶，进行反相色谱纯化；上样量与填料的质量比为1∶30～1∶100；依次用洗脱液进行三次梯度洗脱，每次洗脱体积为2～4倍柱体积；取第二次洗脱液减压浓缩，得到生物碱组分；

所述的有机溶剂可为甲醇、乙醇或者乙腈等；

所述的洗脱液有机相的体积分数为第一次10～20％，第二次20～60％，第三次100％；

所述的反相色谱填料粒径为5～60μm；

(4)水解炮制：直接向步骤(3)所得的生物碱组分中加水，超声至固体完全溶解，滴加氨水调碱性，回流煮沸，冷却，冷冻干燥得到注射用乌头提取物；

所述的水溶液用量为400～600倍量(w∶v)w∶v是指生物碱组分的质量和水溶液的体积比。

所述的水解炮制碱性条件为pH8～10；

所述的水解温度为60～100℃恒温环境，水解时间为20min～3h；

所述的注射用乌头提取物采用外标法，测得单酯型生物碱含量以苯甲酰乌头碱，苯甲酰中乌头碱和苯甲酰次乌头碱的总量计大于20％，双酯型生物碱含量以乌头碱，中乌头碱和次乌头碱的总量计小于4％。另有水解生成的胺醇型生物碱和中间产物焦乌头碱。

淡黄色的乌头提取物，采用外标法测得乌头提取物中单酯型生物碱含量大于20％，双酯型生物碱含量小于4％，换算到药材中双酯型生物碱含量小于0.005％，优于《中国药典》中制川乌和制草乌项下毒性成分双酯型生物碱的质量标准。

与现有技术相比，本发明的积极效果是：