[发明专利]一种高效制备重组人MICA蛋白的方法无效
| 申请号： | 201410027717.5 | 申请日： | 2014-01-21 |
| 公开（公告）号： | CN103789340A | 公开（公告）日： | 2014-05-14 |
| 发明（设计）人： | 肖卫华;钟永军;马佳佳;邬婧;仰露;康文瑶;田志刚 | 申请（专利权）人： | 中国科学技术大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N1/19;C07K14/47;C12R1/84 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 王旭 |
| 地址： | 230026 安*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 制备 重组 mica 蛋白 方法 | ||
1.一种用于在毕赤酵母中高效表达重组人MICA蛋白的表达盒，其特征在于所述表达盒从5’至3’依次包括以下元件：
(1)控制基因转录的毕赤酵母启动子；
(2)控制所述重组人MICA在毕赤酵母中分泌表达的信号肽序列；
(3)所述重组人MICA的编码序列；和
(4)转录终止子；
其中所述信号肽序列为α-factor的Pre序列，其核酸序列如SEQ ID No:9所示。
2.根据权利要求1所述的表达盒，其中所述重组人MICA的编码序列如SEQ ID No:10所示。
3.根据权利要求1所述的表达盒，其中所述启动子为pPIC9K质粒中的AOX1启动子，并且所述转录终止子为pPIC9K质粒中的AOX1转录终止子。
4.根据权利要求3所述的表达盒，其序列如SEQ ID No:13所示。
5.根据权利要求1所述的表达盒，其中所述启动子为pGAPZα-A质粒中的GAP启动子，并且所述转录终止子为pGAPZα-A质粒中的GAP转录终止子。
6.根据权利要求5所述的表达盒，其序列如SEQ ID No:14所示。
7.一种毕赤酵母工程菌，所述毕赤酵母工程菌含有权利要求3或4所述的表达盒。
8.一种毕赤酵母工程菌，所述毕赤酵母工程菌含有权利要求5或6所述的表达盒。
9.一种甲醇诱导表达并纯化人MICA蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)培养根据权利要求7所述的毕赤酵母工程菌，并且用甲醇诱导毕赤酵母AOX1启动子，使得所述工程菌分泌表达人MICA蛋白；和
(2)从发酵液中纯化所述人MICA蛋白。
10.一种组成型表达并纯化人MICA蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)培养根据权利要求8所述的毕赤酵母工程菌，并且利用GAP启动子使得所述工程菌组成型分泌表达人MICA蛋白；和
(2)从发酵液中纯化所述人MICA蛋白。
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