[发明专利]快速鉴定与黄曲霉毒素B1互作的宿主蛋白的方法

权利要求书

1.一种快速鉴定与黄曲霉毒素B₁互作的宿主蛋白的方法，其特征在于：先将黄曲霉毒素B₁与牛血清白蛋白进行偶联，再通过固相层析的方法，筛选与黄曲霉毒素B₁结合的蛋白，经质谱分析鉴定后，再通过体外结合实验验证蛋白与黄曲霉毒素B₁的结合性。

2.根据权利要求1所述的一种快速鉴定与黄曲霉毒素B₁互作的宿主蛋白的方法，其特征在于：所述的通过固相层析的方法来筛选与黄曲霉毒素B₁结合的蛋白，是将牛血清蛋白-黄曲霉毒素B₁偶联复合物展示在甲醇活化后的PVDF膜上，3-5℃过夜孵育；将孵育了牛血清蛋白-黄曲霉毒素B₁的PVDF膜用质量分数为2% 牛血清蛋白溶液进行封闭后，将膜置于小鼠肝脏总蛋白溶液中3-5℃过夜孵育以充分结合，同时用只展示牛血清蛋白分子的PVDF膜置于小鼠肝脏总蛋白溶液中作为阴性对照；再用3-5℃预冷的磷酸盐缓冲液或磷酸盐吐温缓冲液进行非特异性洗脱，3-5℃振摇10-15min，洗涤三-四次，用2M的NaCl进行特异性洗脱，3-5℃振摇25-30min，洗脱液中的互作蛋白浓缩后进行SDS-PAGE分析，银染后取差异条带进行质谱分析鉴定。

3.根据权利要求1所述的一种快速鉴定与黄曲霉毒素B₁互作的宿主蛋白的方法，其特征在于：所述的通过体外结合实验验证蛋白与黄曲霉毒素B₁的结合性，对经质谱鉴定的黄曲霉毒素B₁互作蛋白进行基因克隆、诱导表达、纯化后，通过ELISA的方法验证相应蛋白与黄曲霉毒素B₁的结合性。

4.根据权利要求3所述的一种快速鉴定与黄曲霉毒素B₁互作的宿主蛋白的方法，其特征在于：所述的通过体外结合实验验证，具体步骤为：将牛血清蛋白-黄曲霉毒素B₁偶联复合物包被于孔中，在3-5℃下过夜，2wt.%的牛血清蛋白溶液在37℃下封闭2 h后，加入纯化的黄曲霉毒素B₁互作蛋白37℃孵育2 h，再相继加入一抗和二抗，最后相继加入TMB显色和 H₂SO₄终止液，同时设置包被牛血清蛋白的阴性孔作为对照，经此方法验证出40S核糖体蛋白SA和雌二醇β脱氢酶5与黄曲霉毒素B₁有结合性。

5.根据权利要求4所述的一种快速鉴定与黄曲霉毒素B₁互作的宿主蛋白的方法，其特征在于：所述的一抗为抗蛋白的His标签抗体，37℃孵育1 h；二抗为抗His抗体的HRP标记的山羊抗小鼠IgG，37℃孵育1 h。