[发明专利]一种鸡金银羽位点基因型的分子鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及鸡遗传育种中分子标记应用领域，具体涉及一种鸡金银羽位点基因型的分子鉴定方法。

背景技术

初生雏鸡的雌雄鉴别在养鸡生产中有着重要的意义，在肉鸡生产中雏鸡出壳时鉴别雌雄有利于公母分养，便于根据公母不同的生长发育速度、营养需求给予不同的饲料和饲养管理条件，避免公雏发育快，抢食而影响母雏发育；在商品蛋鸡生产中雏鸡出壳时即淘汰公雏可节省饲养公雏的空间和成本，提高母鸡的成活率和整齐度；对于种鸡可通过鉴别雌雄、只出售不同品系单一性别的雏鸡保护育种成果。雏鸡的性别鉴定方法大体分为两类：一类根据雌雄雏鸡的生殖器官的差异，通过对生殖突起或性腺的直接观察来鉴定，包括器械鉴别法、翻肛鉴别法等；另一类利用鸡性连锁基因的伴性交叉遗传现象，使用带有特定伴性基因基因型的品种或品系进行杂交生产自别雌雄配套系，通过杂交后代雏鸡绒羽的颜色、浅色斑块的大小或不同的羽毛生长速度来鉴别雏鸡性别。自别雌雄相对直接观察法（如翻肛法，器械鉴别法）有鉴别速度快，准确率高，不需要对鉴别人员进行专门的技术培训，对雏鸡损伤小，交叉感染疾病的可能性小的优点。目前在自别雌雄配套系生产中应用的伴性基因有快慢羽基因、金银羽基因和横斑基因。在利用这些基因的自别雌雄方法中，利用金银羽基因自别雌雄可直接通过雏鸡绒羽颜色区分雌雄，更为简单直观，没有时间的限制，而且准确率更高，具有更好的利用价值。利用金银羽基因进行自别雌雄时，使用金羽公鸡与银羽母鸡交配，所生后代公雏绒羽为白色，母雏绒羽为红色。目前金银羽自别雌雄配套系已广泛应用于来源于洛岛红—洛岛白遗传背景的褐壳蛋鸡配套系中，但在其他遗传背景的鸡群中罕见应用，一个重要原因是金银羽位点上等位基因的表达很大程度上受其他位点（如E位点等）上的修饰基因影响，因而在一些遗传背景下很难准确鉴定个体金银羽表型（进而鉴定基因型）。采用本发明的金银羽位点基因型分子鉴定方法，可以在不同鸡种群体中挑选出在金银羽位点基因型不同的公鸡和母鸡进行繁育，从而达到在其他遗传背景下也能利用金银羽基因进行自别雌雄的目的。本发明建立的方法可以快速、简便、准确的鉴定不同个体金银羽位点上的基因型，有助于金银羽自别雌雄技术更广泛的推广和应用。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种鸡金银羽位点基因型的分子鉴定方法，方法易行，操作简便，在金银羽自别雌雄配套系中，雏鸡的绒羽颜色仅凭肉眼观察确定，而银羽杂合子和银羽纯合子表型相同，肉眼无法区分，而此分子鉴定方法可以区分杂合子和纯合子。目前金银羽自别雌雄配套系已广泛应用于来源于洛岛红—洛岛白遗传背景的褐壳蛋鸡配套系中，但在其他遗传背景的鸡群中罕见应用，一个重要原因是金银羽位点上等位基因的表达很大程度上受其他位点上的修饰基因影响，因而在一些遗传背景下很难准确鉴定个体金银羽表型（进而鉴定基因型）。而此分子鉴定方法不受遗传背景的限制，应用范围广泛。能够鉴定出不同个体在金银羽位点上的基因型。

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施：

一种鸡金银羽位点基因型的分子鉴定方法，其步骤是：

A、利用软件primer premier 5.0，根据鸡SLC45A2基因的DNA序列设计引物对M4-S/A，引物长度为22bp：M4-S：5'  ATCCCATTATCGCTGTCTGCAT  3'，M4-A：5'  AATCCGTGAAGAAGAGCATAGT  3'；一种分离的DNA序列，其序列为SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

B、以引物对M4-S/A为扩增引物建立15μL体系如下：1.5μL 10×EasyTaq Buffer(+Mg²⁺)，0.3μL 正反引物（10μM），0.15μL的dNTP(2.5mM)，0.5U的Taq聚合酶，1μL的基因组DNA，加超纯水补齐至15μL；反应程序为94℃预变性5min，94℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环，72℃再延伸5min，15℃，1min，4℃下保存备用；

C、电泳检测PCR产物：取 6 μL PCR产物，加3μL 6×Loading Buffer，制备浓度为1.2 %的琼脂糖凝胶，点样后，在120V电压下电泳40min，溴化乙锭染色，凝胶成像仪检测，根据条带的有无及大小判定是否扩增成功。

D、限制性内切酶酶切：酶切的反应体系为：超纯水3.6μL，10×bufferG 0.5μL，内切酶4U，PCR产物1μL。于37℃酶切16h。