[发明专利]基于微流控微珠阵列芯片和DNA聚合酶介导引物延伸技术的微小核糖核酸检测方法

权利要求书

1.基于微流控微珠阵列芯片和DNA聚合酶介导引物延伸技术的微小核糖核酸检测方法，其特征是，其步骤如下：

(1)生物素修饰的微小核糖核酸捕获探针通过生物素-亲合素结合方法固定于亲合素修饰微球的表面形成功能化微球，该微球固定在微流控芯片检测区的相应微型小室中，形成微流控微珠阵列检测芯片；

(2)将含有微小核糖核酸的样品溶液流入步骤(1)中形成的微流控微珠阵列检测芯片，微小核糖核酸与微球表面的捕获探针杂交形成DNA／RNA二聚体；

(3)流入DNA聚合酶溶液及生物素化延伸底物，以微小核糖核酸为引物，捕获探针为模版，通过DNA聚合酶介导的延伸反应，将生物素化延伸底物增加在微小核糖核酸的3’末端；其中介导反应时间为15～20min；

(4)流入亲合素标记的量子点，该量子点能与微小核糖核酸上结合的生物素识别并固定；

(5)通过计算流入微小核糖核酸后微球表面荧光进行定性和定量。

2.根据权利要求1所述的微小核糖核酸检测方法，其特征是，步骤(1)中，所述的捕获探针的3’末端包含由10个胸腺嘧啶和10个胞嘧啶构成的伸展序列；5’末端包含由5个胸腺嘧啶构成的模版序列。

3.根据权利要求1所述的微小核糖核酸检测方法，其特征是，步骤(1)中，所述的微球是二氧化硅微球、聚苯乙烯类有机聚合物微球、磁性微球和生物大分子聚合物微球中的一种。

4.根据权利要求1所述的微小核糖核酸检测方法，其特征是，步骤(2)中，所述的微小核糖核酸与微球表面的捕获探针杂交的时间为25～35min。

5.根据权利要求1所述的微小核糖核酸检测方法，其特征是，步骤(3)中，所述的DNA聚合酶为去除外切酶活性的Klenow DNA聚合酶；生物素化延伸底物为biotin-11-dATP，其浓度为0.5～1.5μM。

6.根据权利要求1所述的微小核糖核酸检测方法，其特征是，步骤(4)中，所述的量子点为CdSe、CdTe、CdS和复合型量子点中的一种；其发射范围为400nm～700nm。