[发明专利]一种免疫复合物缓冲解离剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及医学检测领域，尤其涉及一种免疫复合物缓冲解离剂，还具体涉及了该种免疫复合物缓冲解离剂检测CIC的应用。

背景技术

细菌、病毒等病原体侵入机体后或致敏物质(抗原，含自身抗原)刺激机体发生免疫应答，进而产生特异性免疫效应细胞或抗体，并与抗原发生特异性结合，所得到的复合物称为免疫复合物(又称抗原抗体复合物，immune complex，IC)，主要有IgG，IgM，IgA，IgE型免疫复合物，其中以IgG和IgM最常见。由于抗原与抗体比例不同，所形成的IC分子大小各异，通常有三种形式：一是抗原抗体比例适当时，形成大分子的不溶性IC(大于19S)，易被吞噬细胞捕获、吞噬和清除。二是抗原量过剩时，形成小分子的可溶性IC(小于6.6S)，易透过肾小球滤过随尿排出体外。三是抗原量稍过剩时，形成中等大小的可溶性IC(8.8-19S)，它既不被吞噬细胞清除，又不能通过肾小球滤过排出，可较长时间游离于血液和其他体液中，又称循环免疫复合物(circulating immuno complex，CIC)。

正常情况下，机体内的游离抗原与相应抗体结合形成IC，可被机体的防御系统清除，作为清除异物抗原的一种方式，对机体有利。但在某些病理情况下，体内形成的IC不能被及时清除，可在局部沉积，通过激活补体，并在血小板、中性粒细胞等参与下，引起一系列连锁反应而导致组织损伤，出现临床症状，称为免疫复合物病(immuno complex disease，ICD)。检查组织内或循环体液中IC的存在有助于某些疾病的诊断、发病机制的研究、预后评估、病情活动观察和疗效判断等。因此，准确、特异、灵敏检测免疫复合物对疾病的诊断、治疗和预后评估具有重要的临床意义，CIC的检测日益受到重视。

世界卫生组织(WHO)曾组织进行CIC检测方法学研究，发现尚无任何一种技术同时具备特异、灵敏、批量高效、重复性好的所有特点。由于方法的复杂性、敏感性和所检测CIC类型的局限性，目前的常用CIC检测技术均受到免疫复合物内免疫球蛋白种类及亚类、复合物大小、抗原与抗体比例、固定补体的能力等因素影响，在临床免疫学实验室应用受到很大限制。

发明内容

本发明针对现有CIC检测技术及检测过程中，不能同时具备特异、灵敏、批量高效、重复性好、不受干扰的技术问题，公开了一种免疫复合物缓冲解离剂，还公开了该种免疫复合物缓冲解离剂的应用领域。进而解决了以上的技术问题。

为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决。

一、针对CIC中抗原的部分：

一种免疫复合物缓冲解离剂，以如下体积比例配比计，各组分及含量为，135μl-165μl的CIC分离剂、290μl-315μl的CIC洗涤剂、5μl-16μl的CIC复溶剂、65μl-76μl的CIC抗原缓冲液解离剂和65μl-76μl的CIC抗原缓冲液解离中和剂。以制备的HBsAg-抗-HBs免疫复合物为例，本发明的试剂配方可以使CIC中的抗原解离率达到76.5%-83.8%(抗原解离率：指CIC解离后检测到的抗原量与实际CIC中抗原量的百分比)。而蛋白酶类消化法、强酸解离法、表面活性剂解离法的抗原解离率均在10%-20%以下。

其中，每1L的CIC分离剂包括以下组分：5.2g-7.7g的硼砂、4.1g-6.1g的硼酸、70g-90g的聚乙二醇、6.2g-9.2g的氯化钠、100μl-500μl的液体生物防腐剂、余量为蒸馏水。CIC分离剂的作用如下：当每1L的CIC分离剂中包括5.2g-7.7g的硼砂、4.1g-6.1g的硼酸、70g-90g的聚乙二醇、6.2g-9.2g的氯化钠、100μl-500μl的液体生物防腐剂、余量为蒸馏水时，被分离的CIC达到最大量，同时改用氯化钠也可避免了传统沉淀方法中氟化钠残留对后续检测抗原的干扰。本发明采用的聚乙二醇，作为优选选用聚乙二醇6000；本发明中提到的液体生物防腐剂为Proclin-300。

每1L的CIC洗涤剂包括以下组分：5.2g-7.7g的硼砂、4.1g-6.1g的硼酸、35g-45g的聚乙二醇、8.0g-11.7g的氯化钠、100μl-500μl的液体生物防腐剂、余量为蒸馏水。以上配方的CIC洗涤剂主要针对CIC分离剂的配方进行设计，其作用是洗去体液标本中多余的杂蛋白。本发明采用的聚乙二醇，作为优选选用聚乙二醇6000；本发明中提到的液体生物防腐剂为Proclin-300。