[发明专利]预测肝衰竭预后的GSTP1甲基化定量检测法及试剂盒

权利要求书

1.预测肝衰竭预后的GSTP1甲基化定量检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有提取待测样本基因组DNA的试剂、重亚硫酸盐修饰基因组DNA的试剂、5×预混PCR反应体系、标准品、阳性对照、阴性对照以及针对目的基因GSTP1启动子的甲基化特异性引物对和内参基因ALU-C4的特异性引物对与相应的Taqman荧光探针，具体序列如下：

GSTP1-上游引物：5’TTCGGGGTGTAGCGGTCGTC 3’；

GSTP1-下游引物：5’GCCCCAATACTAAATCACGACG 3’；

GSTP1-探针: 5’Fam AAATCCCGCGAACTCCCGCC 3’BHQ1；

ALU-C4-上游引物：5’GGTTAGGTATAGTGGTTTATATTTGTAATTTTAGTA 3’；

ALU-C4-下游引物：5’ATTAACTAAACTAATCTTAAACTCCTAACCTCA 3’；

ALU-C4-探针: 5’Fam CCTACCTTAACCTCCC 3’BHQ1。

2.根据权利要求1所述的预测肝衰竭预后的GSTP1甲基化定量检测试剂盒，其特征在于：5×预混PCR反应体系，包含热启动Taq聚合酶、三磷酸脱氧核糖核苷、氯化镁、反应缓冲液、PCR反应的增强剂、优化剂以及稳定剂。

3.根据权利要求1所述的预测肝衰竭预后的GSTP1甲基化定量检测试剂盒，其特征在于：标准品为含目的基因片段的质粒。

4.根据权利要求1所述的预测肝衰竭预后的GSTP1甲基化定量检测试剂盒，其特征在于：阳性对照为重亚硫酸盐修饰的100%甲基化的人基因组DNA。

5.根据权利要求1所述的预测肝衰竭预后的GSTP1甲基化定量检测试剂盒，其特征在于：阴性对照为双蒸馏水。

6.预测肝衰竭预后的GSTP1甲基化定量检测法，其特征在于：采集待测样

本清晨空腹外周血；提取待测样本外周血基因组DNA；重亚硫酸盐修饰基因组DNA；定量检测GSTP1基因启动子甲基化程度：利用目的基因GSTP1启动子的甲基化特异性引物对和内参基因ALU-C4的特异性引物对与相应的Taqman荧光探针，对重亚硫酸盐处理过的基因组DNA进行实时荧光定量聚合酶链式（PCR）反应；根据标准品的扩增结果制备标准曲线；根据目的基因GSTP1和内参基因ALU-C4的阈值循环值，得到待测样本中GSTP1基因启动子甲基化程度的定量值。

7.根据权利要求6所述的预测肝衰竭预后的GSTP1甲基化定量检测法，其特征在于：待测样本GSTP1基因启动子甲基化程度的计算方法为：甲基化率=100%×2 exp-[ΔCp(样品GSTP1 Cp值-样品ALU-C4 Cp值)- ΔCp（阳性对照GSTP1 Cp值-阳性对照ALU-C4 Cp值）]。