[发明专利]应用逆向免疫层析反应的定量检测方法及试剂盒和外部设备

说明书

技术领域

本发明涉及一种应用逆向免疫层析反应的定量检测方法及试剂盒和外部设备，特别是一种应用逆向免疫层析反应的定量检测方法及试剂盒和外部设备及其所用的试剂盒和外部设备。

背景技术

目前，对于生物样本的检测方法很多，其中IDEXX公司使用了一种特制的试剂盒，它将洗液和显色液存储于试剂盒中，洗液和显色液的上方设置层析膜。它的具体工作原理（以牛奶检测为例）是：在将牛奶样本放入试剂管中加热5分钟（45℃）后，滴入试剂盒中，层析膜利用毛细现象将牛奶样本层析移动至层析膜上的检测点和对照点，使牛奶样本与检测点和对照点内的物质发生反应，然后观察牛奶样本层析到一定位置（检测窗处）后，将试剂盒的一侧按下，由于试剂盒的这一侧上设有两根分别连接洗液池与层析膜及显色液池与层析膜的毛细管，所以试剂盒一侧按下后，毛细管刺穿密封的洗液池和显色液池，并将洗液和显色液吸至层析膜处，然后进行层析移动至检测点和对照点，对检测点和对照点进行洗脱和显色，最后观察检测点和对照点的颜色即可得出检测结果。其试剂盒的结构如图1所示。

但是这中试剂盒由于存储了洗液和显色液，且内部结构较为复杂，因此体积较为庞大，携带不便。另外，由于一般洗液和显色液需要保持较低的温度，试剂盒在长途运输过程中始终需要冷藏保存，其运输成本较高。而且，由于每个试剂盒内的洗液和显色液的需要实现封装在试剂盒内，其用量必须统一才可便于大规模生产，为了使其能适应绝大多数样本的检测，洗液和显色液的封装量一般需大于实际使用量，所以会造成很大的浪费。另外，由于该方案基本都是利用层析膜自身的毛细作用使液体进行流通，所以试剂盒对层析膜的要求较高，需要其内部具有足够多的毛细管，且保存中需避免受潮。因此IDEXX公司所用的层析膜一般也是特制的，其生产成本及保存成本较高。更值得一提的是，该方案只能定性检测样本，不能输出定量结果，所以只能判定阴性阳性，不能输出确定的浓度值。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种应用逆向免疫层析反应的定量检测方法及试剂盒和外部设备。它可以解决现有技术中存在的试剂盒无法输出定量结果、携带不方便、运输成本和保存成本高、及洗液和显色液浪费等问题。

本发明的技术方案：应用逆向免疫层析反应的定量检测方法，其特点是：使用外部设备和试剂盒对待测样本的反应量和反应时间进行精确控制，从而实现逆向免疫层析反应；该剂盒内设有层析膜，层析膜中部载有对照区域和检测区域；当外部设备检测到样本层析到达指定位置，样本层析完成，自动控制外部设备将洗液和显色液或发光液先后注入试剂盒，外部设备控制吸液泵作用于试剂盒，使注入的液体进行逆向层析，并先后与对照区域和检测区域内的物质进行反应（免疫反应和/或化学反应），并最后产生颜色变化或产生可见光，最后外部设备通过识别对照区域和检测区域的光信号，并将对照区域和检测区域的光信号以及内置的标准曲线进行对比后即可得出定量的检测结果。

内置的标准曲线是预先存储在外部设备中的，它是一条信号光强弱与样本中待测物质浓度的对应曲线（可以根据多次实验总结拟合而成）。因此在测得光信号强度后即可对应得到浓度信息。

上述的应用逆向免疫层析反应的定量检测方法中，样本检测的具体步骤包括：

①在试剂盒的其中一侧的加样孔中进行定量加样，样本在层析膜的毛细作用下层析移动至对照区域和检测区域，并与对照区域和检测区域内的物质发生反应；

②当外部设备检测到待测样本层析到指点位置，外部设备又在试剂盒的另一侧的注液孔中先注入洗液，并在加样孔上使用吸液泵进行抽吸，使洗液反向层析移动至加样孔；

③然后在注液孔中加显色液或发光液，同时吸液泵继续工作，使显色液或发光液和洗液进行同向层析，接着对照区域和检测区域上发生显色反应；

④最后外部设备对检测区域和对照区域的光信号（包括颜色信号）进行自动识别，最终外部设备对信号的强弱以及内置的标准曲线进行比对分析后，得出定量的检测结果，并将检测结果显示给使用者。

前述的应用逆向免疫层析反应的定量检测方法中，所述检测区域和对照区域为载有反应物（乳胶/磁珠/抗体）的点或线。

用于前述方法的试剂盒，其特点是：包括条形的层析膜，层析膜外包覆有盒体，盒体的中部设有检测窗，检测窗所在位置的层析膜上设有对照区域和检测区域；所述检测窗两侧的盒体上分别开设有用于添加样本的加样孔和用于添加洗液和显色液或发光液的注液孔，注液孔还用于检测样本的层析位置；所述对照区域和检测区域内分别载有与样本反应的反应物。