[发明专利]一种细菌对抗生素敏感性的鉴定方法及其设备

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体而言，涉及一种细菌对抗生素敏感性的鉴定方法及其设备。

背景技术

药物敏感试验简称药敏试验（或耐药试验），是为了了解病原微生物对各种抗生素的敏感（或耐受）程度，以指导临床合理选用抗生素药物。

目前检测细菌对抗生素的敏感性常采用比浊法，是根据细菌在含有抗生素溶液中生长的数量状况来鉴定，但是，抗生素杀死细菌的过程是比较复杂的，有时细菌在刚接触抗生素时部分细菌被杀死，浊度下降，但由于部分细菌被诱导产酶后，细菌又开始重新生长，因此，检测细菌浊度的变化来得知对药物的敏感性需要较长时间来得到细菌对抗生素的敏感性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种细菌对抗生素敏感性的鉴定方法，以解决上述的问题。

在本发明的实施例中提供的一种细菌对抗生素敏感性的鉴定方法，包括下列步骤：（a）分别取多个同一菌种的已知对某一抗生素敏感、中度敏感和具有耐药性的菌株，分别对其进行抗生素诱导；

（b）分别将诱导后的菌株进行细胞内代谢产物的提取；

（c）分别对提取的细胞内代谢产物进行质谱分析，得到敏感菌质谱图，中敏菌质谱图和耐药菌质谱图；

（d）分别将敏感菌质谱图，中敏菌质谱图和耐药菌质谱图所含有的信息转化为特征峰形式；

（e）分别将特征峰形式对应的代谢物波峰值进行聚类分析，分别得到敏感、中度敏感和具有耐药性的菌株的聚类图谱，并将三者的数据进行保存得到数据库；

（f）取相同菌种的待测菌，重复步骤（a）-（d），将待测菌的代谢物波峰值与已得到的数据库合并，以相关度作为聚类参数进行分类，得到待测菌在聚类图谱中的位置，由此得到待测菌的抗生素敏感性。

优选地，所述同一菌种取自肠杆菌科、微球菌科、假单胞菌科、伯克氏菌科、李斯特菌科、链球菌科。

优选地，所述肠杆菌科包括不动杆菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、埃希氏菌属、克雷伯氏菌属、摩根菌属、苍白杆菌属、巴氏杆菌属、变形杆菌属、沙门氏菌属和沙雷氏菌属；

所述微球菌科包括葡萄球菌属；

所述假单胞菌科包括假单胞菌属；

所述伯克氏菌科包括伯克氏菌属；

所述李斯特菌科包括李斯特菌属；

所述链球菌科包括肠球菌属和链球菌属。

优选地，在所述步骤（a）中，所述抗生素诱导采用CLSI推荐的步骤进行。

优选地，在步骤（a）中，诱导时间为4-6h。

优选地，在步骤（a）中，诱导时间为4h。

优选地，在所述步骤（b）中，细胞内代谢产物的提取采用甲醇-氯仿法。

优选地，在所述步骤（e）中，进行所述聚类分析时，分类数量选择为3-8，且聚类错误的菌株数量低于总数量的5%，且去掉其数据。

本发明还提供了细菌对抗生素敏感性的鉴定方法的设备，包括：进样系统、分离系统、质谱系统、数据分析系统和报告系统；

所述进样系统为放置样品的部位；

所述分离系统将代谢提取物成分分开；

所述质谱系统对所述分开的代谢提取物成分进行质谱检测，得到质谱图；

所述数据分析系统将质谱图信息转化为特征峰形式的数据并获取数据库的信息对样品进行聚类定位；

所述报告系统是将样品聚类定位的信息输出。

本发明以已知对某一抗生素敏感、中度敏感和具有耐药性的同一菌种中的菌株为材料，由于诱导后的菌株中细胞内代谢产物成分的不同，将其进行聚类分析，得到敏感菌、中度敏感菌和具有耐药菌的聚类图谱，通过对待测菌与聚类图谱比较，得到待测菌在聚类图谱中的位置，以此进行鉴定，缩短了鉴定需要的时间。

附图说明

图1示出了本发明实施例1中大肠埃希菌对头孢他啶的敏感菌质谱图；

图2示出了本发明实施例1中大肠埃希菌对头孢他啶的中度敏感菌质谱图；

图3示出了本发明实施例1中大肠埃希菌对头孢他啶的耐药菌质谱图；

图4示出了本发明实施例1中大肠埃希菌对头孢他啶的敏感性数据库的聚类树状图；

图5示出了本发明实施例1测定的待测大肠埃希菌的聚类定位图；

图6示出了本发明实施例2中金黄色葡萄球菌对青霉素G的敏感菌质谱图；

图7示出了本发明实施例2中金黄色葡萄球菌对青霉素G的中度敏感菌质谱图；

图8示出了本发明实施例2中金黄色葡萄球菌对青霉素G的耐药菌质谱图；