[发明专利]一种从胎盘中灌洗造血干细胞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从胎盘中灌洗造血干细胞的方法。

背景技术

目前在国际血液系统疾病的治疗中主要采取的造血干细胞移植的方法，根据细胞的来源，可分为三类：骨髓造血干细胞移植(BMT)、动员周围血干细胞移植(MPST)和脐带血干细胞移植(UCBT)。前两者干细胞来源丰富，一般有核细胞数可达5-10×10⁸/Kg，CD34+细胞(一种造血干/祖细胞的表面标记)可达1-5×10⁶/Kg，可是由于供者和受体之间需HLA严格相符，才能保证移植的成功，否则供者造血干细胞不易在病人体内植活，即使成活也会发生较严重的移植物抗宿主病(GVHD)。在一个家庭的子女中，仅有1/4 HLA相符的机率，而在非血缘关系的无关供者中，这种机率只有百分之一，极大的限制了BMT或MPST在临床上的广泛应用。

近十余年来脐带血造血干细胞移植在临床上成功的应用促进了脐带血造血干细胞研究的发展。脐带血来自于胎盘，通常在妇女分娩后废弃，现在发现脐带血中含丰富的造血干细胞，其CD34+细胞的浓度和骨髓类似，约占总细胞数的0.1-0.5％，而更早期的造血干细胞CD34-还较骨髓浓度更高。作为一种造血细胞的来源，现在利用脐带血移植手术正在逐渐增加。与BMT相比，UCBT的优势在于减少了严重的移植物抗宿主反应，有效的扩大了对于那些缺少合适的人类白细胞抗原配型家庭或者无关供体移植的可能性。脐带血移植主要的限制在于脐血中的造血干细胞数量有限。这种限制促使临床中使用2倍剂量单位脐血移植较大的成年受助人，另一种方法是进行体外造血干细胞扩增培养，但体外扩增需要花费时间，费用也高，更重要的是扩增的同时，造血干细胞也发生分化，临床应用的结果表明脐血细胞扩增前后对移植无多大差异。

人类足月胎盘存在大量的造血干细胞，比脐带血有更多的造血干细胞，而且这些胎盘造血干细胞在冷冻储存前后都可以分离出来。胎盘造血干细胞菌落形成单位（CFU）的活性是确定的，在免疫缺陷鼠中的移植实验已经证明胎盘细胞在移植中的潜力。这些结果有力地表明，人类足月胎盘有可能成为一种新型的用于移植的造血干细胞的来源。并且胎盘中有大量的造血干细胞，胎盘血干细胞是较为早期的干细胞，能在体内分化成各种细胞，胎盘血内含有丰富的各种阶段早期造血干细胞，其含量大约是脐带血的十几倍，一个胎盘中的造血干细胞可完全满足于两个成年人的需求，若能和脐带血细胞一起应用于病人，无疑大大增加了造血干细胞的含量，使这造血干细胞可完全应用于所有的适用人群。

专利CN01131190.8公开了一种通过剪碎消化的方法获得造血干细胞的方法，方法复杂，获得的造血干细胞数量少、纯度低，且细胞容易染菌。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供了一种从健康产妇的足月胎盘中灌洗造血干细胞的方法。

所述的方法包括胎盘的收集、胎盘的初检、胎盘的预消毒、胎盘及母血检测、胎盘造血干细胞的灌洗、造血干细胞的浓缩纯化六个步骤，各步骤具体为：

（1）胎盘的收集：在手术室无菌环境下收集胎盘及母血，存放于无菌的胎盘储运盒中，贴好标签、条码，胎盘储运盒的温度保持在4-10 ℃，24小时内送达实验室；

（2）胎盘的初检：检查胎盘储运盒盒内温度、标签、送达日期、储运盒是否有渗漏、是否有母血血样；

（3）胎盘的预消毒：将胎盘的胎儿面展开放置于胎盘冲洗盒的底部，用生理盐水冲洗胎盘表面，打开胎盘冲洗盒底面的排水孔，去掉冲洗的生理盐水，检查胎盘表面钙化情况；

（4）胎盘及母血检测：对所取的胎盘和母血样本进行检测，检测的项目包括肝炎病毒检测、艾滋病毒检测、性病检测、组织配型（HLA）检测、造血干/祖细胞定性检测（CFU-GM）；

（5）胎盘造血干细胞的灌洗：将胎盘在无菌条件下用无菌生理盐水清洗掉胎盘上的血凝块及积血，采用消毒剂消毒后，将灌注液针头插入胎盘脐动脉中，胎盘灌注回收瓶针头插入脐静脉中，止血钳夹紧，缓慢开启恒流泵，灌注液经胶管、开关、蠕动泵、针头、胎盘动脉、胎盘、胎盘静脉、胎盘灌注回收瓶针头，最后在灌洗液回收瓶中接收灌洗液；