[发明专利]一种乙型流感病毒Vero细胞冷适应株及其应用

说明书

 

技术领域：

本发明涉及一种乙型流感病毒Vero细胞冷适应株，并涉及以此适应株作为母本毒株与其他流行毒株进行重配，从而获得含有流行株表面抗原的Vero细胞冷适应株，以作为制备Vero细胞流感减毒活疫苗或流感减毒活疫苗以及流感灭活疫苗的毒种，属于生物制品技术领域。

背景技术：　

流感病毒（influenza virus）是一种能引起急性呼吸道疾病的病毒，具有高度传染性，主要经空气飞沫传播，因此它能在短期内突然发生，迅速蔓延，造成不同程度的流行，甚至世界大流行，发病率高并伴有一定的死亡率，是目前人类尚不能有效控制的世界性传染病。

流感病毒属于正粘病毒科，其病毒颗粒呈球形或丝状，核衣壳呈螺旋对称，病毒基因组为单股负链分节段的RNA，有包膜。根据病毒核蛋白（NP）和基质蛋白（MP）的抗原性，可将流感病毒分为甲（A）、乙（B）、丙（C）三型，其中甲型和乙型流感病毒的基因含有8个RNA片段，丙型流感病毒的基因含有7个片段；甲型流感病毒又可根据流感病毒血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）抗原性不同，再分为若干亚型。甲型流感病毒常以流行形式出现，乙型流感呈局部爆发，丙型流感主要是以散发形式出现。其中甲型和乙型流感病毒与人类有密切联系，甲型流感病毒除感染人外，还可感染飞禽、猪、马等动物。而人在生活中与这些动物接触频繁，为流感病毒产生变异提供有利条件，变异后的病毒会导致流感流行，变异程度大则导致大流行。

乙型流感病毒是流感的主要病原之一，只有一个亚型，宿主特异性较强，至今只发现感染人和海豹。1990 年就已经报道了世界范围内流行的乙型流感病毒，根据其抗原特性和HA1 区的核苷酸序列,可以分为两大谱系，代表的毒株分别为B/ Yamagata/ 16/ 88 和B/ Victoria/ 2/ 87 (这两大谱系分别简称为Yamagata 系和Victoria系)。同甲型流感病毒一样，乙型流感病毒也是通过在HA和NA基因上的点突变和多种氨基酸选择性突变，特别是血凝素的重链区(HA1)的变异，改变抗原特性来逃避机体已有的免疫保护，从而不断导致流感的流行。因此乙型流感病毒抗原是三价流感疫苗的重要组成部分。

接种流感疫苗是预防和降低流感严重程度的最有效手段，包括灭活疫苗和减毒活疫苗。1941年鸡胚制备的流感灭活疫苗在美国首次获得批准，在全世界得到广泛应用。目前使用的主要是用鸡胚制备的灭活的流感三联裂解疫苗，包括甲型流感病毒H₁N₁株、H₃N₂株和乙型流感病毒毒株。疫苗株的组分是由WHO根据每年全球流感病毒的变化规律，推荐的用于下一年度疫苗生产用流感病毒流行株的表面抗原来确定的。

流感减毒活疫苗因具备滴鼻途径接种、提供粘膜免疫和细胞免疫且免疫保护更持久的特点，而优于灭活疫苗。目前只有美国和俄罗斯生产流感减毒活疫苗，其疫苗种子批均来源于鸡胚高产的流感病毒冷适应株，在美国为A/Ann Arbor/6/60 (H₂N₂)和B/Ann Arbor/1/66，在俄罗斯为A/Leningrad/134/17/57 (H₂N₂)和B/USSR/60/69。

但是，以鸡胚作为培养基质存在以下不足之处：(1)潜在污染、可能造成鸡传染病因接种疫苗而波散；(2)连续传代常变异，造成疫苗与人群中流行毒株不匹配，使疫苗效力降低；(3)培养周期过长，难于大规模生产以满足流感大流行突发性需求；(4)纯化过程复杂；(5)易引起过敏反应。尤其是2003年以来全世界范围内高致病性禽流感的流行，使采用鸡胚生产流感病毒疫苗风险性增加。研究出安全有效的疫苗已经成为流感疫苗重要研究方向，尤其要应对流感大流行时不受鸡胚来源限制，世界卫生组织建议用哺乳动物细胞培养流感病毒来替代鸡胚制备流感疫苗。