[发明专利]一种单细跑海带粉及海带寡糖的制备方法

权利要求书

1.一种单细胞海带粉及海带寡糖的制备方法，其特征在于具体制备方法为：

（1）、菌株的筛选

以海藻酸钠为唯一碳源，将海边采集的腐烂海带放入无菌生理盐水充分涮洗，得到冲洗液，吸取1ml冲洗液进行10倍、100倍和1000倍三个梯度稀释，每个梯度在用固体筛选培养基制备而成的平板上进行涂布，将涂布好的平板置于30℃恒温培养箱中培养，72h后观察平板，挑取周围有凹陷或者晕圈的单菌落确定为实验菌株，经16srRNA鉴定后属于假交替单胞菌属HAS；

（2）、粗酶液的制备

挑取该菌株的单菌落，接入液体发酵培养基中，24h后以4%的接种量进行传代，连续传4代待菌株状态稳定后，对发酵液经行离心，4000r/min，4℃，30min，所得上清液即为粗酶液；

（3）、海带的降解

用蒸馏水充分冲洗海带表面泥沙，将洗好的海带放入三角瓶中，加入一定量的灭菌海水，使海带的含量为10-50%，再接入2-10%的粗酶液，放入20-40℃的摇床中，150r/min旋转震荡12-48h；

（4）、一次性获得单细胞海带和海带寡糖

对降解产物进行离心，2000-5000r/min下离心10-30min，将沉淀物在-50℃下进行冷冻干燥10-20h，得到单细胞海带粉，上清液进行选装蒸发浓缩，经除盐除蛋白处理后在-50℃冷冻干燥8-12h，制备海带寡糖。

2.根据权利要求1所述的一种单细跑海带粉及海带寡糖的制备方法，其特征在于所述步骤（1）中的固体筛选培养基为（w/v）：海藻酸钠2%，NaNO₃ 0.1%，NaCl 1.5%，KH₂PO₄ 0.05%，MgSO_4·7H₂O 0.05%，FeSO_4·7H₂O 0.001%，琼脂1%，蒸馏水，pH 为7.2。

3.根据权利要求1所述的一种单细跑海带粉及海带寡糖的制备方法，其特征在于所述步骤（2）中液体发酵培养基为（w/v）：海藻酸钠0.7%，蛋白胨0.3%，NaCl 2.5%，MgSO₄ ·7H₂O 0.025%，KH₂PO4 0.5%，NaNO₃ 0.025%，FeSO₄·7H₂O 0.001%，pH为 7.2。

4.根据权利要求1所述的一种单细跑海带粉及海带寡糖的制备方法，其特征在于所述步骤（3）（4）中海带经酶解后一次性获得单细胞海带粉和寡糖。