[发明专利]一种单细跑海带粉及海带寡糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及利用微生物分泌的胞外酶降解海带，具体是涉及一种单细跑海带粉及海带寡糖的制备方法，其产品作为食品添加剂、保健品、生物农药及饲料添加剂等用途。

背景技术

海带，又名昆布，叶片似宽带，梢部渐窄，一般长2～4米，宽20～30厘米(在海底生长的海带较小，长1～2米，宽15～20厘米)。海带通体呈橄榄褐色，干燥后变为深褐色、黑褐色，上附白色粉状物。海带素有“长寿菜”、“海上之蔬”、“含碘冠军”的美誉，从营养价值来看，是一种保健长寿的食品。除了作为海洋食品以外,由于其富含具有生理活性且可发酵得海藻多糖,如褐藻胶、褐藻糖胶和褐藻淀粉等,因此在食品、医药、农业、能源等领域极具开发潜力。

目前，利用微生物法制备单细胞海带粉的技术还未见报道，本发明利用本实验室筛选到的海洋菌株Pseudoalteromonasstrain：HAS产生的酶作用于海带发现，该酶在短时间内能把海带降解为泥状，显微镜下能观察到单个的海带细胞，并且对降解完的上清液进行还原糖及总糖含量测定发现两种糖类含量均非常高。制备出的海带单细胞及海带寡糖经干燥后可以制备成食品、保健品、调味料、水产动物及畜牧动物的饲料等。

发明内容

本发明的目的是提供一种单细跑海带粉及海带寡糖的制备方法，该方法利用筛选到的海洋菌株Pseudoalteromonasstrain：HAS产生的酶降解海带，产生海带单细胞及海带寡糖；方法简单，成本低，易于操作。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：一种单细胞海带粉及海带寡糖的制备方法，具体制备方法为：

1、菌株的筛选

以海藻酸钠为唯一碳源，将海边采集的腐烂海带放入无菌生理盐水充分涮洗，得到冲洗液，吸取1ml冲洗液进行10倍、100倍和1000倍三个梯度稀释，每个梯度在用固体筛选培养基制备而成的平板上进行涂布，将涂布好的平板置于30℃恒温培养箱中培养，72h后观察平板，挑取周围有凹陷或者晕圈的单菌落确定为实验菌株，经16srRNA鉴定后属于假交替单胞菌属HAS。

2、粗酶液的制备

挑取该菌株的单菌落，接入液体发酵培养基中，24h后以4%的接种量进行传代，连续传4代待菌株状态稳定后，对发酵液经行离心，4000r/min，4℃，30min，所得上清液即为粗酶液。

3、海带的降解

用蒸馏水充分冲洗海带表面泥沙，将洗好的海带放入三角瓶中，加入一定量的灭菌海水，使海带的含量为10-50%，再接入2-10%的粗酶液，放入20-40℃的摇床中，150r/min旋转震荡12-48h。

4、一次性获得单细胞海带和海带寡糖

降解完后对降解产物进行离心，2000-5000r/min下离心10-30min，把海带细胞及细小组织与可溶性糖类分开。将沉淀物在-50℃下进行冷冻干燥10-20h，得到单细胞海带粉，上清液进行选装蒸发浓缩，经除盐除蛋白处理后在-50℃冷冻干燥8-12h，制备海带寡糖。

步骤1中的固体筛选培养基为（w/v）：海藻酸钠2%，NaNO₃ 0.1%，NaCl 1.5%，KH₂PO₄ 0.05%，MgSO_4·7H₂O 0.05%，FeSO_4·7H₂O 0.001%，琼脂1%，蒸馏水，pH 为7.2。

步骤2中液体发酵培养基为（w/v）：海藻酸钠0.7%，蛋白胨0.3%，NaCl 2.5%，MgSO₄ ·7H₂O 0.025%，KH₂PO4 0.5%，NaNO₃ 0.025%，FeSO₄·7H₂O 0.001%，pH为 7.2。

菌株HAS的生理生化特征为：乳白色菌落、海洋细菌、革兰氏阴性、杆状细菌、氧化酶阳性、不产芽胞、能产生脂酶和明胶酶、最适生长温度10℃-30℃，最适NaCl浓度1%-10%。

本发明的有益效果在于：该方法利用筛选到的海洋菌株Pseudoalteromonasstrain：HAS产生的酶降解海带，降解后可同时制备海带单细胞及海带寡糖；方法简单，成本低，易于操作，制备的海带单细胞具备很高的营养价值及药用价值，制备的海带寡糖具备较高的生物活性，促进植物根的生长、抗菌、抗肿瘤、提高免疫力、增强体力等。