[发明专利]人中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）的制备方法

权利要求书

1.一种人中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：

（1）提供编码NGAL的核苷酸序列；

（2）将所述NGAL的核苷酸序列克隆到pPICZαB酵母表达载体中；

（3）将所述酵母表达载体转化至同一酵母宿主；

（4）诱导所述酵母宿主表达C端带有组氨酸标签的NGAL；

（5）纯化经步骤（4）处理后的NGAL。

2.根据权利要求1所述的人中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）的制备方法，其特征在于，所述人中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.根据权利要求1所述的人中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）的制备方法，其特征在于，所述酵母宿主为汉逊酵母、毕赤酵母、假丝酵母或光滑球拟酵母中的任意一种。

4.根据权利要求3所述的人中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）的制备方法，其特征在于，所述酵母宿主为毕赤酵母。

5.根据权利要求4所述的人中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）的制备方法，其特征在于，所述毕赤酵母为X-33或G-115。

6.根据权利要求1所述的人中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）的制备方法，其特征在于，所述组氨酸标签是含有六个连续的组氨酸的氨基酸序列。

7.根据权利要求1所述的人中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中的诱导表达使用甲醇作为唯一碳源，并使甲醇的终浓度为0.5%～3%(V/V)。

8.根据权利要求1所述的人中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）的制备方法，其特征在于，所述步骤（5）中的纯化操作在Ni²⁺-NTA基质中进行，并采用咪唑溶液进行洗脱。