[发明专利]基于AllGlo探针荧光定量PCR的hsa-miR-188-5p检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.基于AllGlo探针荧光定量PCR的hsa-miR-188-5p检测试剂盒，其特征在于所述hsa-miR-188-5p为一种人源性miRNA，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.15＇-CAUCCCUUGCAUGGUGGAGGG-3＇；

所述基于AllGlo探针荧光定量PCR的hsa-miR-188-5p检测试剂盒，设有盒体、隔板、外源性参照瓶、茎环逆转录试剂瓶、实时荧光定量PCR试剂瓶；隔板设在盒体内，外源性参照瓶、茎环逆转录试剂瓶、实时荧光定量PCR试剂瓶插在隔板上，外源性参照瓶内装有外源性参照，茎环逆转录试剂瓶内装有茎环逆转录试剂，实时荧光定量PCR试剂瓶内装有实时荧光定量PCR试剂。

2.如权利要求1所述基于AllGlo探针荧光定量PCR的hsa-miR-188-5p检测试剂盒，其特征在于所述外源性参照采用cel-miR-39，所述cel-miR-39为一种线虫类miRNA,其核苷酸序列为：SEQ ID NO.25＇-UCACCGGGUGUAAAUCAGCUUG-3＇；其工作浓度为5nmol。

3.如权利要求1所述基于AllGlo探针荧光定量PCR的hsa-miR-188-5p检测试剂盒，其特征在于所述茎环逆转录试剂包括以下组份：200单位/μL的MMLV酶、10m mol dNTP混合液、5×RT缓冲液、40单位/μL的RNA酶抑制剂、10m mol的MgCl₂、1μmol的特异的miRNA的逆转录引物、miRNA标准品，浓度为100n mol；所述5×RT缓冲液由250m mol Tris-HCl、375m mol KCl、15m mol MgCl₂、50m mol DTT组成。

4.如权利要求3所述基于AllGlo探针荧光定量PCR的hsa-miR-188-5p检测试剂盒，其特征在于所述miRNA的特异逆转录引物由hsa-miR-188-5p的特异逆转录引物、外源性参照cel-miR-39的特异逆转录引物和内源性参照U6的特异逆转录引物组成；

所述hsa-miR-188-5p的特异逆转录引物的核苷酸序列为：SEQ ID NO.35＇-GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACCCCTCCAC-3＇；

所述外源性参照cel-miR-39的特异逆转录引物的核苷酸序列为：SEQ ID NO.45＇-GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACCTGTTCCT-3＇；

所述内源性参照U6的特异逆转录引物的核苷酸序列为：SEQ ID NO.55＇_-AACGCTTCACGAATTTGCGT_-3＇。

5.如权利要求1所述基于AllGlo探针荧光定量PCR的hsa-miR-188-5p检测试剂盒，其特征在于所述实时荧光定量PCR试剂包括以下组份：10×Taq缓冲液、10m mol的MgCl₂、5单位/μL的Taq聚合酶、10m moldNTP混合液、100mL无核酶水、10μmol特异正向引物、10μmol通用反向引物和AllGlo探针；所述10×Taq缓冲液包括100m mol Tris-HCl，500m mol KCl。

6.如权利要求5所述基于AllGlo探针荧光定量PCR的hsa-miR-188-5p检测试剂盒，其特征在于所述特异正向引物由hsa-miR-188-5p的特异引物、外源性参照cel-miR-39的特异引物和内源性参照U6的特异引物组成；

所述hsa-miR-188-5p的特异引物的核苷酸序列为：

SEQ ID NO.65＇-TCCCTACATCCCTTGCAT-3＇；

所述外源性参照cel-miR-39的特异引物的核苷酸序列为：

SEQ ID NO.75＇-CAGAGTCACCGGGTGTAAAT-3＇；

所述内源性参照U6的特异引物的核苷酸序列为：

SEQ ID NO.85＇-CTCGCTTCGGCAGCACA-3＇。