[发明专利]一种诗琳通含笑离体培养再生植株方法

权利要求书

1.一种诗琳通含笑离体培养再生植株方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）采取外植体及其材料处理：采取生长健壮，无病虫害的诗琳通含笑7年生大树主杆上萌发出的嫩枝条，经保鲜处理后，低温带回实验室；所述材料处理是剪去嫩枝条上的叶片，用新洁尔灭清洗后用流水冲洗，切成2cm带1-2个腋芽的茎段；

（2）建立无菌繁殖体：将修剪好的茎段经培养、诱导，建立无菌繁殖体；

（3）增殖培养：将获得的无菌繁殖体接种于增殖培养基中培养；

（4）生根培养：将增殖培养后获得的丛生芽接种于生根培养基中培养；

（5）移植；

（6）幼苗培育。

2.根据权利要求1所述的诗琳通含笑离体培养再生植株方法，其特征在于：步骤（2）所述建立无菌繁殖体的具体方法是：将修剪好的茎段在实验室里用0.1%的氯化汞消毒灭菌3-10分钟，再用无菌水洗3-4次，一瓶一段接种于初代培养基MS1上，在室温为20-30℃，每日光照8-12小时，光照强度800-2000LX的条件下培养15-30天，从叶腋萌发出绿芽，剪取绿芽接种于增殖培养基MS2上，诱导出腋芽和不定芽并能够连续生长繁殖，完成无菌繁殖体的建立。

3.根据权利要求1所述的诗琳通含笑离体培养再生植株方法，其特征在于：步骤（3）所述增殖培养是：将无菌繁殖体接种于增殖培养基MS2中，放置在人为控制室温为20-30℃，每日光照8-12小时，光照强度800-2000LX的条件下培养15-30天，从叶腋萌发出无菌绿芽，剪取绿芽接种于增殖培养基MS2上，芽丛增殖，培养15-30天后，芽丛增殖倍数2-4倍，在无菌条件下再将其分割转接，经过反复继代培养扩大繁殖。

4.根据权利要求1所述的诗琳通含笑离体培养再生植株方法，其特征在于：步骤（4）所述生根培养是：当丛生芽高在15mm以上时，将芽从基部切下，分割成单株接种于生根培养基MS3中，放置在室温20-30℃，每日光照8-12小时，光照强度在1000-10000LX的条件下15-20天，苗开始出根，再放置到75%遮荫条件下温室中促根并炼苗20-30天，生根瓶苗叶片展开，茎芽生长健壮，形成完整植株。

5.根据权利要求1所述的诗琳通含笑离体培养再生植株方法，其特征在于：步骤（5）所述移植是指将生根的组培瓶苗移栽到育苗杯中，完成瓶苗从人工控制培养条件给养到幼苗自养的过程，具体方法是：将瓶中的幼苗小心取出，洗净黏在苗上的培养基，移植到填满基质的育苗杯中，每一杯种植一株苗，移植覆土深度刚好盖住根系，一般不超过1厘米，压紧基质，使苗根和基质紧密接触，移植完成后淋透定苗水。

6.根据权利要求5所述的诗琳通含笑离体培养再生植株方法，其特征在于：所述基质是由泥炭土与椰糠按2:1的比例充分混合得到。

7.根据权利要求1或5所述的诗琳通含笑离体培养再生植株方法，其特征在于：所述移植是将根系生长良好的瓶苗移入温室驯化后再进行，将开始出根的瓶苗直接移入温室驯化，瓶苗在温室里驯化、炼苗的过程中继续生长出根，可提前8-12天将驯化好的瓶苗进行移植。

8.根据权利要求1所述的诗琳通含笑离体培养再生植株方法，其特征在于：步骤（6）所述幼苗培育是指瓶苗在移植后保持基质湿润，空气相对湿度在95%以上，防止叶片失水，之后逐步控制基质水分，相对湿度控制在80%-60%，控制培养温度25-28℃，荫棚用70%的遮光网遮光。

9.根据权利要求1所述的诗琳通含笑离体培养再生植株方法，其特征在于：步骤（6）所述幼苗培育是在移植后第三天采用0.1%百菌清喷雾消毒灭菌，能有效防止病菌滋生，之后每隔10-15天喷雾一次；当有新芽萌发、新根长出时，喷施1500倍营养液，根据幼苗生长状况，每隔半个月喷施一次。

10.根据权利要求1所述的诗琳通含笑离体培养再生植株方法，其特征在于：步骤（6）所述幼苗培育是移植后生长稳定了，长出新芽和新根后，逐步增加光照强度，直到进行全光照常规管理，幼苗培育至15厘米高时，移至大一号花盆培育大苗。