[发明专利]一种诗琳通含笑离体培养再生植株方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种的植株的离体培养再生植株方法，具体涉及一种诗琳通含笑的离体培养再生植株方法，属于生物离体组织培养育苗技术领域。 

背景技术

诗琳通含笑（学名：Michelia sirindhorniae (Noot. et Chal.) N. H. Xia et X. H. Zhangj）目前，国际上还普遍使用诗琳通木兰（Magnolia sirindhorniae Noot. & Chalermglin）是世界珍稀濒危木兰科品种之一，是极度濒危树种，原产地泰国，属常绿乔木，叶、花都非常芳香，可提炼名贵的植物香精。

诗琳通含笑为木兰科常绿大乔木，树干挺直，高可达30-35 m，花朵呈象牙白，单朵花可开2-3天，花期在6-7月。诗琳通含笑喜生于高湿的淡水沼泽林中，是木兰科大家族中唯一能在水中生长的树种，且生长快速，其木质优良名贵，泰国当地的皇宫贵族都以拥有诗琳通制作的高档家具或物品为荣。诗琳通含笑是泰国国王因为比较宠爱自己的女儿诗琳通公主，以其名字命名了这个泰国珍贵濒危木科珍惜树种。诗琳通含笑也因此被称为“泰国之宝”，并因其珍贵而稀少被世界自然保护联盟列为保护树种。2012年被中国（中山）南方绿化博览会评为形态最佳乔木金奖。诗琳通含笑是优良的用材和庭园观赏树种。

目前，木兰科植物的组培繁殖存在污染率高、褐化严重、诱导率低、移植成活率低的难题，而对于诗琳通含笑这类濒危树种的繁殖这些更是阻碍其繁殖技术发展的瓶颈。

发明内容

本发明目的在于提供一种诗琳通含笑的离体培养再生植株方法，以保存和抢救世界珍稀濒危木兰科品种，实现极度濒危木兰科树种的繁殖，为研究木兰科植物大树嫩枝进行组织培养，克服污染率高、褐化严重、诱导率低、移植成活率低等组培繁殖技术提供宝贵的学术研究经验。

本发明的目的通过以下技术方案来予以实现：一种诗琳通含笑离体培养再生植株方法，包括以下步骤：

（1）采取外植体及其材料处理：采取生长健壮，无病虫害的诗琳通含笑7年生大树主杆上萌发出的嫩枝条，经保鲜处理后，低温带回实验室；所述材料处理是剪去嫩枝条上的叶片，用新洁尔灭清洗后用流水冲洗，切成2cm带1-2个腋芽的茎段；

（2）建立无菌繁殖体：将修剪好的茎段经培养、诱导，建立无菌繁殖体；

（3）增殖培养：将获得的无菌繁殖体接种于增殖培养基中培养；

（4）生根培养：将增殖培养后获得的丛生芽接种于生根培养基中培养；

（5）移植；

（6）幼苗培育。

步骤（2）所述建立无菌繁殖体的具体方法是：将修剪好的茎段在实验室里用0.1%的氯化汞消毒灭菌3-10分钟，再用无菌水洗3-4次，一瓶一段接种于初代培养基MS1上，在室温为20-30℃，每日光照8-12小时，光照强度800-2000LX的条件下培养15-30天，从叶腋萌发出绿芽，剪取绿芽接种于增殖培养基MS2上，诱导出腋芽和不定芽并能够连续生长繁殖，完成无菌繁殖体的建立。

步骤（3）所述增殖培养是：将无菌繁殖体接种于增殖培养基MS2中，放置在人为控制室温为20-30℃，每日光照8-12小时，光照强度800-2000LX的条件下培养15-30天，从叶腋萌发出无菌绿芽，剪取绿芽接种于增殖培养基MS2上，芽丛增殖，培养15-30天后，芽丛增殖倍数2-4倍，在无菌条件下再将其分割转接，经过反复继代培养扩大繁殖。

步骤（4）所述生根培养是：当丛生芽高在15mm以上时，将芽从基部切下，分割成单株接种于生根培养基MS3中，放置在室温20-30℃，每日光照8-12小时，光照强度在1000-10000LX的条件下15-20天，苗开始出根，再放置到75%遮荫条件下温室中促根并炼苗20-30天，生根瓶苗叶片展开，茎芽生长健壮，形成完整植株。

步骤（5）所述移植是指将生根的组培瓶苗移栽到育苗杯中，完成瓶苗从人工控制培养条件给养到幼苗自养的过程，具体方法是：将瓶中的幼苗小心取出，洗净黏在苗上的培养基，移植到填满基质的育苗杯中，每一杯种植一株苗，移植覆土深度刚好盖住根系，一般不超过1厘米，压紧基质，使苗根和基质紧密接触，移植完成后淋透定苗水。

所述基质是由泥炭土与椰糠按2:1的比例充分混合得到。

所述移植是将根系生长良好的瓶苗移入温室驯化后再进行，将开始出根的瓶苗直接移入温室驯化，瓶苗在温室里驯化、炼苗的过程中继续生长出根，可提前8-12天将驯化好的瓶苗进行移植。