[发明专利]从蛹虫草中提取虫草素组分的方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药生物制备技术领域，具体涉及一种从蛹虫草中提取虫草素组分的方法，以及该提取得到的虫草素组分在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

虫草素是蛹虫草产生的次级代谢产物，并且体外实验被证实是具有广泛的生物活性和药理作用的核苷类似物。在1951年，加拿大的Cunningham等从蛹虫草的原浆液中分离得到一种物质，命名为虫草素（Cordycepin）,是由腺苷和有着碳支链的脱氧戊糖组成的核苷酸，因此也被称为3’-脱氧腺苷，是从真菌类生物中分离出的第一个脱氧核苷类抗生素，含氮配糖体的核酸衍生物，属嘌呤类生物碱。

早在20世纪70年代虫草素就被发现具有抗肿瘤、抗病原虫和抑制mRNA的作用。90年代发现，添加腺苷脱氨酶抑制剂对其抗肿瘤活性的表达起着重要的作用，这说明虫草素的合成是遵循嘌呤腺苷途径的，因此有关虫草素的研究从而获得突破性的进展。虫草素能够治疗急性前B淋巴细胞和前T淋巴细胞白血病患者。关于抗肿瘤作用机制Jagger认为虫草素含有一个游离的醇基，醇基可以掺入到癌细胞中作用于DNA，从而抑制了癌细胞的核酸合成。也有研究表明，虫草素是RNA合成的抑制剂，选择性的抑制RNA合成，从而抑制蛋白质的合成。研究表明，虫草素还表现出极强的抗真菌、抗HIV-Ⅰ型病毒和选择性抑制梭菌属细菌活性。虫草素能干扰细胞RNA和DNA的合成，抑制不正常细胞的分裂并能作为区别细胞中不能的RNA聚合酶的工具，并具有修复基因、保护生命体遗传密码的特殊功效。

近年来蛹虫草的研究已经成为一个热点，尤其是蛹虫草中虫草素的研究，但是关于虫草素的提取与纯化方法都比较复杂。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对以上现有技术的不足，提供一种从蛹虫草中提取虫草素组分的方法，该方法简单可控，重复性好，提取得到的组分中虫草素含量高，批次稳定。

本发明所采用的技术方案为：

一种从蛹虫草中提取虫草素组分的方法，该方法包括以下步骤：

（1）超微粉碎：取烘干的蛹虫草子实体为原料，放入超微粉碎机中进行超微粉碎，得到超微粉。

（2）溶剂提取：将超微粉用超纯水进行水煮提取，离心，取上清液干燥至固状，然后用乙醇进行醇沉处理，离心，收集醇沉上清液，将醇沉上清液旋蒸后干燥至固状，得到粗提物。

（3）高压液相制备系统分离：将粗提物用15%甲醇-水溶液（即甲醇与超纯水以3：17基础的体积比配比而成）溶解至100mg/mL，经制备液相DAC反相色谱柱进行分离，反相分离填料为C18，洗脱方式为先用5%-15%甲醇-水溶液梯度洗脱、再用15%甲醇-水溶液等度洗脱，检测波长260nm，得到各组分经体外抗肿瘤活性筛选后，选取活性最强的组分旋蒸浓缩后真空干燥，即得到本发明目的虫草素组分。该步是整个提取方法的关键，经过大量的数据研究和反复试验，我们发现当使用15%甲醇-水溶液将粗提物溶解至100mg/mL时，最后收集得到的目的虫草素组分中虫草素的含量为最高，当浓度高于100mg/mL或低于100mg/mL时，最终得到的目的虫草素组分中其虫草素含量经过测试都没有100mg/mL时高；而先用5%-15%甲醇-水溶液梯度洗脱、再用15%甲醇-水溶液等度洗脱的洗脱方式也对目的组分的获得至关重要，使用该洗脱方式时，洗脱得到的各个峰之间比较分得开，使得到的虫草素组分中虫草素纯度高，提取率高。

所述步骤（1）中超微粉碎具体步骤为每次称取100～200g蛹虫草子实体，放入超微粉碎机中粉碎超微粉碎1min，使达到颗粒大小3000目的粉碎效果，同时粉碎全过程用-15～-20℃的水作为超微破碎机内部冷却液。

作为优选，所述步骤（2）中超微粉与超纯水按料液比（质量体积比）1︰8进行混合均匀，水煮时间为30～90min，提取三次，即第一次水煮完成后离心，取沉淀进行第二次水煮，第二次水煮完成后离心，取沉淀进行第三次水煮，第三次水煮完成后离心，将三次离心得到的上清液进行合并，进入下一步骤。该步骤能尽量多地将蛹虫草子实体中的组分溶解到水提上清中，从而增大了有效虫草素组分被提取的可能性，使虫草素的提取率提高。