[发明专利]水稻转基因检测试剂盒

权利要求书

1.一种水稻转基因检测试剂盒由引物组合和膜芯片组成，其特征在于引物组合为6重双启动寡核苷酸引物组合，各对引物的碱基序列5’-3’如下，其中碱基I为次黄嘌呤核苷酸：

Cry1Ab：正向引物： ATTCAATTCAACGACATGAAIIIIICCTTGAC

反向引物：TTGTAACGGCTATTGATGGTIIIIICATCGAA；

Cry1Ac：正向引物：TTCAGGACCAGGATTCACTGIIIIIGACCTCG

反向引物：AGGTGAATAGGGGTCACAGAIIIIIACCTCAC；

BAR：正向引物： GACGACCTCGTCCGTCTGCGIIIIIGCTATCC

反向引物：CAGCAGGTGGGTGTAGAGCGIIIIICCCAGTC；

CaMV35S：正向引物：GATAAAGGAAAGGCCATCGTIIIIIATGCCTC

反向引物：TGGGATTGTGCGTCATCCCTIIIIICAGTGGA；

NOS 3’：正向引物： TTAAGATTGAATCCTGTTGCIIIIITTGCGAT

反向引物：CGCGCGCGATAATTTATCCTIIIIIGCGCGCT；

gos9：正向引物： ACAGATATATAGGGCAGAAAIIIIIGCTACAA

反向引物：CGTCACGTTCTTCAGGCTATIIIIIGGTACAG；

膜芯片为顺序固定在支持膜表面的6组探针序列和一组阳性对照（Positive）探针序列，6组探针序列和阳性对照探针序列的碱基序列5’-3’如下，各探针的5’端做氨基标志：

Cry1Ab探针: NH₂-5’-GCAGCTAATCTTCACCTCAGCGTGCTTCGAGACGTTA

GCGTGTTTGGGCAAAGGTGGGG-3’；

Cry1Ac探针: NH₂-5’-TAGAGGGTATATTGAAGTTCCAATTCACTTCCCATCCA

CATCTACCAGATATAGAGTTC-3’ ；

BAR探针: NH₂-5’-CGCAACGCCTACGACTGGACGGCCGAGTCGACCGTGTA

CGTCTCCCCCCGCCACCAGCG-3’；

CaMV35S探针: NH₂-5’-AGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCA

CGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATG-3’；

NOS 3’探针: NH₂-5’-ATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATA

CATTTAATACGCGATAGAAAA-3’；

gos9探针: NH₂-5’-GCACAAAGCTTGTTAAGATTGGTCCATGGGGTGGAAAT

GGAGGAGGTTCTGTAGACATA-3’；

Positive探针: NH₂-5’-TAGCAAGGATGAGTATTCGAACAGTTAGAGGCAGT

CAGGGAGAATCACTACGTACAAGC-3’。

2.根据权利要求1所述的水稻转基因检测试剂盒，其特征在于所述引物组合中有非对称PCR扩增引物，为5’端带生物素标志的Tag引物，其碱基顺序如下所示：

Tag引物：biotin-5’- GACGGACACCTACCCATATCACCCTTGACG -3’。

3.根据权利要求1所述的水稻转基因检测试剂盒，其特征在于所述水稻转基因检测试剂盒由引物组合、膜芯片和辅料组成，辅料为脱氧核糖核苷三磷酸、EX-Taq聚合酶和5’端带生物素标志的阳性寡核苷酸单链DNA，5’端带生物素标志的阳性寡核苷酸单链DNA的碱基顺序为biotin-5'- GCTTGTACGTAGTGATTCTCCCTGACTGCCTCTAACTGTTCGAATACTCATCCTTGCTA-3’。