[发明专利]水稻转基因检测试剂盒

说明书

所属技术领域

本发明涉及检测用品领域，具体为一种水稻转基因检测试剂盒。

背景技术

水稻是我国的主粮农作物，每年消费量近两亿吨。随着转基因技术在农业产业中的应用，多种抗虫基因（Cry1Ab, Cry1Ac, Cry1Ab/Ac等）和抗除草剂基因（BAR等）被用于转基因水稻的研发。1998年，我国育成了首例转基因抗虫水稻，之后多个转基因水稻品系相继被研发出来。在关注经济效益的同时，转基因水稻的环境和食品安全问题同样需要引起社会的高度重视。对于转基因产品的管理，各国已经相继制定并出台了相应的法律法规，对转基因作物的环境释放和产品销售采取严格的管理措施。我国于2001年5月23日发布了国务院第304号令《农业转基因生物安全管理条例》，实现了对转基因生物的规范管理。因此，快速、准确、灵敏、廉价和相应通量的转基因产品检测技术是非常关键的。转基因产品的检测技术主要包括基于蛋白的检测方法和基于核酸的检测方法。酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫试纸条和Western杂交等方法是目前主要的基于蛋白的检测方法，其共同特点是需要通过一定的处理步骤从样品中释放出目标蛋白（抗原），然后利用抗体特异性的结合抗原蛋白，最后通过酶标或金属标偶联抗体与抗原抗体复合物结合，从而产生可检测的信号，该类方法的缺点是检测灵敏度相对较低，并且需要制备高特异性抗体，同时检测容易受到多种因素的影响，出现假阳性。而基于核酸的检测方法是目前最普遍、最准确的转基因检测技术，检测方法主要包括PCR（聚合酶链式反应）技术和基于分子杂交的基因芯片技术。目前仍以PCR技术应用最为广泛，其常用的技术方法包括普通定性PCR、巢式PCR、多重PCR、荧光定量PCR等方法。普通定性PCR方法检测效率低，尤其检测多基因对象时更加费时费力；巢式PCR虽然提高了检测的灵敏度，但同样存在检测效率低的问题；多重PCR方法可以在一个反应中同时检测多个基因，但常规的电泳检测结果很难判断，容易出现假阳性和假阴性结果；荧光定量PCR方法灵敏度高，但其成本高，并且需要特殊检测仪器。基因芯片也是常用的转基因产品检测技术，目前一般采用玻璃片作为固相支持物，实验过程需要相应的点样仪和芯片识读仪，同样成本较高。因此研发一种快速、方便、灵敏、廉价、可视化和高通量的检测方法将具有非常好的应用前景。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术费时费力成本高的缺陷，提供一种操作简单，快速灵敏，检测通量大，检测结果可视化，成本低廉的水稻转基因检测试剂盒。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明的水稻转基因检测试剂盒由引物组合和膜芯片组成，其特征在于引物组合为6重双启动寡核苷酸引物（DPO）组合，各对引物的碱基序列5’-3’如下，其中碱基I为次黄嘌呤核苷酸：

Cry1Ab：正向引物： ATTCAATTCAACGACATGAAIIIIICCTTGAC

反向引物：TTGTAACGGCTATTGATGGTIIIIICATCGAA；

Cry1Ac：正向引物：TTCAGGACCAGGATTCACTGIIIIIGACCTCG

反向引物：AGGTGAATAGGGGTCACAGAIIIIIACCTCAC；

BAR：正向引物： GACGACCTCGTCCGTCTGCGIIIIIGCTATCC

反向引物：CAGCAGGTGGGTGTAGAGCGIIIIICCCAGTC；

CaMV35S：正向引物：GATAAAGGAAAGGCCATCGTIIIIIATGCCTC

反向引物：TGGGATTGTGCGTCATCCCTIIIIICAGTGGA；

NOS 3’：正向引物： TTAAGATTGAATCCTGTTGCIIIIITTGCGAT

反向引物：CGCGCGCGATAATTTATCCTIIIIIGCGCGCT；

gos9：正向引物： ACAGATATATAGGGCAGAAAIIIIIGCTACAA

反向引物：CGTCACGTTCTTCAGGCTATIIIIIGGTACAG；

膜芯片为顺序固定在支持膜表面的6组探针序列和一组阳性对照（Positive）探针序列，6组探针序列和阳性对照探针序列的碱基序列5’-3’如下，各探针的5’端做氨基标志（NH₂）：

Cry1Ab探针: NH₂-5’-GCAGCTAATCTTCACCTCAGCGTGCTTCGAGACGTTA