[发明专利]一种TALE聚体库的构建方法

权利要求书

1.一种TALE聚体库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）TALE单体扩增：分别以pTALE-NI，pTALE-NG，pTALE-NH，pTALE-HD载体为模板，使用引物对TALE-Fn/TALE-Rn进行扩增，分别得到第一类至第十五类单体的混合物和第十六类单体N16，其中，所述n为1至16；

（2）构建酶切连接产物：分别将所述第一类至第十五类单体进行酶切和连接，得到第一至第八酶切连接产物；

（3）酶切连接产物扩增：分别以所述第一至第八酶切连接产物和第十六类单体N16为模板，使用引物对attB1-F/attB1-R进行扩增，分别得到第一类至第六类五聚体混合物、三聚体混合物、二聚体混合物和第十六类单体N16扩增产物；

（4）TALE聚体克隆：分别将所述第一类、第二类、第三类、第四类、第五类、第六类五聚体混合物、三聚体、二聚体混合物以及第十六类单体N16扩增产物，与pDonr221载体（Kana+）进行BP反应，将BP反应产物进行转化并进行测序；

（5）TALE聚体库构建：根据确定的五聚体、三聚体、二聚体和单体序列信息，得到第一类至第五类五聚体库、三聚体库、二聚体库和单体库。

2.根据权利要求1所述的TALE聚体库的构建方法，其特征在于，所述TALE单体扩增包括如下步骤：

分别以pTALE-NI，pTALE-NG，pTALE-NH，pTALE-HD为模板，

使用引物对TALE-F1/TALE-R1，进行扩增，得到第一类单体的混合物，即NI1，NG1，NH1和HD1；

使用TALE-F2/TALE-R2引物对进行扩增，得到第二类单体的混合物，即NI2，NG2，NH2和HD2；

使用TALE-F3/TALE-R3引物对进行扩增，得到第三类单体的混合物，即NI3，NG3，NH3和HD3；

使用TALE-F4/TALE-R4引物对进行扩增，得到第四类单体的混合物，即NI4，NG4，NH4和HD4；

使用TALE-F5/TALE-R5引物对进行扩增，得到第五类单体的混合物，即NI5，NG5，NH5和HD5；

使用TALE-F6/TALE-R1引物对进行扩增，得到第六类单体的混合物，即NI6，NG6，NH6和HD6；

使用TALE-F5/TALE-R7引物对进行扩增，得到第七类单体的混合物，即NI7，NG7，NH7和HD7；

使用TALE-F8/TALE-R1引物对进行扩增，得到第八类单体的混合物，即NI8，NG8，NH8和HD8；

使用TALE-F5/TALE-R9引物对进行扩增，得到第九类单体的混合物，即NI9，NG9，NH9和HD9；

使用TALE-F10/TALE-R1引物对进行扩增，得到第十类单体的混合物，即NI10，NG10，NH10和HD10；

使用TALE-F5/TALE-R11引物对进行扩增，得到第十一类单体的混合物，即NI11，NG11，NH11和HD11；

使用TALE-F12/TALE-R1引物对进行扩增，得到第十二类单体的混合物，即NI12，NG12，NH12和HD12；

使用TALE-F5/TALE-R13引物对进行扩增，得到第十三类单体的混合物，即NI13，NG13，NH13和HD13；

使用TALE-F3/TALE-R13引物对进行扩增，得到第十四类单体的混合物，即NI14，NG14，NH14和HD14；

使用TALE-F2/TALE-R13引物对进行扩增，得到第十五类单体的混合物，即NI15，NG15，NH15和HD15；

使用TALE-F1/TALE-R13引物对进行扩增，得到第十六类单体，即单体NI16，NG16，NH16和HD16，命名为N16。