[发明专利]含有树状分子染料的寡核苷酸探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种寡核苷酸探针，包括：

能够与感兴趣的靶核酸杂交的核酸序列；和

共价联接于该寡核苷酸的引物，其中该引物共价联接于包含两个或更多个荧光部分的树状分子基团。

2.权利要求1的寡核苷酸探针，其中所述树状分子基团共价联接于所述引物的5’-端。

3.权利要求1-2中任一项的寡核苷酸探针，其中所述一个或多个荧光部分是选自下组的荧光染料：Cy2、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7、IR染料、Dyomics染料、Oregon green488、Pacific Blue、罗丹明绿和Alexa染料。

4.权利要求1-3中任一项的寡核苷酸探针，其中所述树状分子基团具有如下的结构式：

其中

L包含选自下组的反应性基团：炔、叠氮化物、巯基、-烯、异腈和四嗪；并且

i是约0-6的整数；并且

Q是选自下组的荧光部分：Cy2,Cy3,Cy3.5,Cy5,Cy5.5,Cy7,IR染料,Dyomics染料,Oregon green488,Pacific Blue,罗丹明绿,和Alexa染料。

5.权利要求1-4中任一项的寡核苷酸，其中所述树状分子基团是通过点击反应与所述引物共价连接的，并且其中该点击反应是在所述引物上存在的炔部分与所述树状分子基团中存在的叠氮部分之间发生的，或者该点击反应是在所述引物上存在的叠氮部分与树状分子基团中存在的炔部分之间发生的。

6.一种生成寡核苷酸探针的方法，包括：

生成寡核苷酸文库；

提供多个引物，其中每一个引物均包含炔部分；

形成扩增子文库，其中每一个扩增子均包含所述寡核苷酸文库的成员和来自所述多个引物中的引物；

提供包含两个或更多个荧光部分且包含叠氮部分的树状分子基团；和

通过使所述炔部分与所述叠氮部分反应而使所述扩增子与所述树状分子基团反应，从而生成寡核苷酸探针文库。

7.权利要求6的方法，其中该树状分子基团共价联接于所述多个引物中每一个的5’-端，并且其中所述一个或多个荧光部分是选自下组的荧光染料：Cy2,Cy3,Cy3.5,Cy5,Cy5.5,Cy7,IR染料,Dyomics染料,Oregon green488,Pacific Blue,罗丹明绿,和Alexa染料，并且其中所述树状分子基团包含三个或更多个荧光部分。

8.权利要求6-7中任一项的方法，其中所述树状分子基团具有如下的结构式：

其中

L包含选自下组的反应性基团：炔、叠氮化物、巯基、-烯、异腈和四嗪；并且

i是约0-6的整数；并且

Q是选自下组的荧光部分：Cy2、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7、IR染料、Dyomics染料、Oregon green488、Pacific Blue、罗丹明绿、和Alexa染料。

9.权利要求6-8中任一项的方法，其中所述树状分子基团是通过点击反应与所述多个引物中的每一个共价连接的，并且其中该点击反应是在所述引物上存在的炔部分与所述树状分子基团中存在的叠氮部分之间发生的，或者是在所述引物上存在的叠氮部分与所述树状分子基团中存在的炔部分之间发生的。

10.一种用于检测或分析感兴趣的靶核酸的方法，包括：

提供寡核苷酸探针，其包含能够与感兴趣的靶核酸杂交的核酸序列和共价联接于第一反应性部分的引物；

使该寡核苷酸探针与待分析感兴趣的靶核酸之存在的样品在一定条件下接触，使得如果所述感兴趣的靶核酸存在，则在该寡核苷酸探针与该感兴趣的靶核酸之间形成杂交复合物；和

使该经接触的样品与包含两个或更多个荧光部分以及第二反应性部分的树状分子成像剂反应，从而该第二反应性部分与该第一反应性部分反应而形成共价键；和

对所述两个或更多个荧光部分进行成像，以检测或分析所述感兴趣的靶核酸之存在。