[发明专利]一种利用基因组编辑技术实现原位激活基因的表达方法及其应用

权利要求书

1.一种原位激活长非编码RNA基因CCAT1-L的表达方法，为：通过同源重组技术，在受体的靶基因启动子之后，靶基因的基因序列之前，插入一个第二启动子及筛选标记基因，并通过筛选标记筛选获得阳性结果，所述靶基因为CCAT1-L，所述第二启动子选自CMV启动子或EF1alpha启动子。

2.如权利要求1所述原位激活长非编码RNA基因CCAT1-L的表达方法，其特征在于，包括下列步骤：

1)构建特异识别靶序列TALEN质粒；

2)设计并构建Donor质粒，所述Donor质粒的左右同源臂之间包括顺序串联的第二启动子及筛选标记基因；

3)将步骤1)和2)构建的TALEN质粒和Donor质粒转入受体细胞，通过同源重组对受体细胞进行基因组改造，培养受体细胞并根据筛选标记筛选获得阳性结果并验证。

3.如权利要求2所述原位激活长非编码RNA基因CCAT1-L的表达方法，其特征在于，步骤1)中，所述TALEN质粒所针对的靶位点位于靶基因的启动子与其基因起始序列之间；步骤2)中，所述Donor质粒对应的同源重组靶序列位于靶基因的启动子与其基因起始序列之间。

4.如权利要求2所述原位激活长非编码RNA基因CCAT1-L的表达方法，其特征在于，所述筛选标记基因为抗性基因和荧光蛋白标记基因。

5.如权利要求2所述原位激活长非编码RNA基因CCAT1-L的表达方法，其特征在于，所述Donor质粒的左右同源臂之间，筛选标记基因之后，还顺序插入有终止序列及可诱导的启动子。

6.如权利要求2所述原位激活长非编码RNA基因CCAT1-L的表达方法，其特征在于，所述Donor质粒的左右同源臂之间包括顺序串联的CMV启动子、puromycin抗性基因和EGFP荧光蛋白标记基因；所述左右同源臂之间，EGFP荧光蛋白标记基因之后可选择地顺序插入有BGH和SV40两种终止序列以及Ptight启动子。

7.如权利要求6所述原位激活长非编码RNA基因CCAT1-L的表达方法，其特征在于，所述puromycin抗性基因和EGFP荧光蛋白标记基因之间插入有T2A序列。

8.如权利要求1-7中任一权利要求所述的表达方法的用途，为用于原位激活长非编码RNA基因CCAT1-L的过表达，从而应用于LncRNA的功能研究领域。