[发明专利]一种提取微小RNA的试剂盒及其提取方法

权利要求书

1.一种提取微小RNA的试剂盒，其特征在于，包括盒体、装有第一磁珠液的试剂瓶、装有第二磁珠液的试剂瓶、装有裂解液的试剂瓶、装有洗脱液的试剂瓶以及装有洗涤液的试剂瓶；

所述盒体的内底壁上设置有泡沫垫；且所述泡沫垫的边沿与所述盒体的内侧壁相贴；

所述泡沫垫上设置有五个凹槽，每个所述凹槽内分别设置有一个所述试剂瓶；

所述第一磁珠液内包括多个表面修饰有能够与微小RNA配对的靶向序列或随机序列的第一磁珠；所述第二磁珠液内包括多个表面修饰有带负电荷的亲水性高分子聚合物的第二磁珠。

2.根据权利要求1所述的提取微小RNA的试剂盒，其特征在于：

所述盒体为一个具有开口的矩形盒体，且所述矩形盒体的开口与底壁相对；所有所述凹槽均由从所述矩形盒体的底壁到所述开口的方向延伸。

3.根据权利要求2所述的提取微小RNA的试剂盒，其特征在于：

所有所述试剂瓶均为圆柱形，所有所述凹槽的横截面均为圆形；

每个所述凹槽的内壁与其对应设置的所述试剂瓶的外壁相贴合。

4.根据权利要求1-3任一项所述的提取微小RNA的试剂盒，其特征在于；

所述第一磁珠的平均粒径为40-80nm。

5.根据权利要求4所述的提取微小RNA的试剂盒，其特征在于，

所述第二磁珠的平均粒径大于500nm。

6.一种使用权利要求1所述的试剂盒提取微小RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

在血清或者血浆样品中加入所述裂解液进行裂解，得到裂解混合物，将所述裂解混合物离心，得到上清液；

在所述上清液中加入第一磁珠液，并进行混匀，得到第一磁珠表面捕获有微小RNA的第一混合液；

在所述第一混合液中加入第二磁珠液，并进行混匀，得到第二混合液；

将所述第二混合液放置在外加磁场下进行磁吸，并将所述第二混合液中的液体除去，得到混合磁珠；

在所述混合磁珠中加入洗涤液，并使得吸附在所述混合磁珠表面杂质溶解，再将溶有杂质的洗涤液吸除；

将洗涤后的所述混合磁珠晾干后加入洗脱液，进行震荡混匀，使得吸附在第一磁珠表面的微小RNA溶解在洗脱液中，得到含有微小RNA的磁珠液；

将含有微小RNA的磁珠液中的液体与混合磁珠分离，并保存至离心管中，得到微小RNA。

7.根据权利要求6所述的提取微小RNA的方法，其特征在于，在所述在血清或者血浆样品中加入裂解液进行裂解，得到裂解混合物，将所述裂解混合物离心，得到上清液的步骤中：

所述裂解液中包括表面活性剂、异硫氰酸盐、胍盐、锂盐、RNA酶抑制剂、pH值为6.5-8.5的缓冲液。

8.根据权利要求6所述的提取微小RNA的方法，其特征在于，在所述在血清或者血浆样品中加入裂解液进行裂解，得到裂解混合物，将所述裂解混合物离心，得到上清液的步骤中，

所述裂解的时间为：10-20分钟；所述离心的转速为10000-12000转/分钟；所述离心的时间为5-15分钟。

9.根据权利要求6-8任一项所述的提取微小RNA的方法，其特征在于，在所述步骤在所述混合磁珠中加入洗涤液，并使得吸附在所述混合磁珠表面杂质溶解，再将溶有杂质的洗涤液吸除的步骤中；

所述洗涤液包括乙醇、异丙醇或乙醇和异丙醇的混合液。

10.根据权利要求9所述的提取微小RNA的方法，其特征在于，在所述将所述洗涤后的混合磁珠晾干后加入洗脱液，进行震荡混匀，使得吸附在第一磁珠表面的微小RNA溶解在洗脱液中，得到含有微小RNA的磁珠液的步骤中；

所述洗脱液为超纯水。