[发明专利]一种提取微小RNA的试剂盒及其提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种提取微小RNA的试剂盒及其提取方法。

背景技术

微小RNA（miRNAs）是一类长度为21～25个核糖核苷酸的非编码内源性小单链RNAs分子。1993年，Lee等首次在线虫体内发现第一个miRNA（lin-4），能在翻译水平通过抑制核蛋白lin-14的表达来调节线虫的幼虫发育进程。随后，科学家们应用随机克隆和测序、生物信息学预测的方式，发现miRNAs广泛存在于灵长类、啮齿类、鸟类、鱼类、蝇类、蠕虫类、植物、病毒中。从2002年有统计的200多种到2008年底的将近9000种，miRNAs的发现呈现爆发性增长，并且不断有新物种中的miRNAs被发现。

人类miRNAs基因仅约占基因总数的2%-3%，但却能调控人体内1/3的蛋白表达，这种转录后调控作用直接影响了这些靶基因的功能，参与了生物体内的多个系统的生理、病理过程。miRNAs在生物体中的作用涉及发育、老化、分泌、代谢、病毒感染、免疫反应、肿瘤等等方面，尤其是作为癌基因或者抑癌基因在肿瘤发生发展中的作用显的尤为重要。miRNAs基础与临床研究的最终目的是要为疾病的诊断、治疗、预防提供有效的方向。对多个肿瘤细胞系和正常细胞系miRNAs表达谱的分析表明，特定的miRNAs表达谱能够标识特定的肿瘤生物特征或病理生理过程。

有研究表明，不同类型的消化系统肿瘤有特定的miRNAs异常表达，和mRNA表达谱的零散不同，miRNAs在特定肿瘤中聚集成簇表达，如miR-192、miR-194、miR-215在肠源性肿瘤中成簇高表达，因此miRNAs可以作为癌症诊断的工具。

由于血清或血浆中miRNAs比较稳定，且其具有潜在的疾病标志物的巨大价值。对于肿瘤患者诊断具有较好的敏感性及特异性，加上取材的相对无创性，显示出了其作为肿瘤标志物的优势。

在相关技术中，现在有一些miRNAs提取试剂盒可以用于血清或血浆中miRNAs提取，例如，美国Qiagen公司的miRNeasy mini kit。但是，利用这种试剂盒其提取miRNAs的效率较差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提取微小RNA的试剂盒以及提取方法，以解决上述的问题。

在本发明的实施例中提供了一种提取微小RNA的试剂盒，包括盒体、装有第一磁珠液的试剂瓶、装有第二磁珠液的试剂瓶、装有裂解液的试剂瓶、装有洗脱液的试剂瓶以及装有洗涤液的试剂瓶；

所述盒体的内底壁上设置有泡沫垫；且所述泡沫垫的边沿与所述盒体的内侧壁相贴；

所述泡沫垫上设置有五个凹槽，每个所述凹槽内分别设置有一个所述试剂瓶；

所述第一磁珠液内包括多个表面修饰有能够与微小RNA配对的靶向序列或随机序列的第一磁珠；所述第二磁珠液内包括多个表面修饰有带负电荷的亲水性高分子聚合物的第二磁珠。

本发明实施例提供的提取微小RNA的试剂盒，其内部设置了装有第一磁珠液的试剂瓶、装有第二磁珠液的试剂瓶、装有裂解液的试剂瓶、装有洗脱液的试剂瓶以及装有洗涤液的试剂瓶；在进行微小RNA提取的过程中，可利用装有裂解液的试剂瓶中的裂解液将血清或者血浆样品中被包裹的核酸（包括微小RNA）游离，在通过将含有游离核酸的样品与第一磁珠液混合，由于第一磁珠液中含有表面修饰能够与微小RNA配对的靶向序列或随机序列，因此游离的微小RNA可以被第一磁珠捕获，并吸附在第一磁珠的表面；而在利用第一磁珠捕获微小RNA的过程中，可以在混合液中加入第二磁珠液，第二磁珠液中含有的第二磁珠起到增强磁场的作用，进而使得第一磁珠在磁吸的过程中不被或者很少被移除，提高了第一磁珠的获得率。捕获有微小RNA的第一磁珠再通过洗涤液洗涤之后，其表面所吸附的大量的杂质（核酸杂质以及少量的蛋白质）可被去除；最后再通过洗脱液试剂瓶中的洗脱液，在65-75℃下孵育8-12分钟后冰浴1-3分钟，将第一磁珠表面吸附的微小RNA的洗脱之后，即可得到微小RNA。

通过荧光定量PCR证明，通过本发明的微小RNA提供的试剂盒所抽提的微小RNA其检测所得的Ct值（荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数）比现有技术中Qiagen公司的miRNeasy mini kit所提取的微小RNA低，因此，本发明实施例提供的这种试剂盒可更高效的提取血浆或者血清中的微小RNA，特别适合提取血浆或者血清样品中含量较低或者低拷贝的微小RNA。

可选的，所述盒体为一个具有开口的矩形盒体，且所述矩形盒体的开口与底壁相对；所有所述凹槽均由从所述矩形盒体的底壁到所述开口的方向延伸。