[发明专利]一种荧光标记多重PCR艰难梭菌检测试剂盒

权利要求书

1.一种荧光标记多重PCR艰难梭菌检测试剂盒，其特征在于，包括有用于扩增艰难梭菌的以下基因座的引物：tpi、tcdA、tcd B、tcdC、cdtA和cdtB。

2.根据权利要求1所述的荧光标记多重PCR艰难梭菌检测试剂盒，其特征在于，所述的引物序列是：tpi，SEQ ID NO.1～2；tcdA，SEQ ID NO.3～4；tcdB，SEQ ID NO.5～6；tcdC，SEQ ID NO.7～8；cdtA，SEQ ID NO.9～10；cdtB，SEQ ID NO.11～12。

3.根据权利要求2所述的荧光标记多重PCR艰难梭菌检测试剂盒，其特征在于，各个引物在扩增体系中的浓度是：SEQ ID NO.1～2、0.80 μM；SEQ ID NO.3～4、0.60 μM；SEQ ID NO.5～6、0.50 μM；SEQ ID NO.7～8、1.0 μM；SEQ ID NO.9～10、1.1 μM；SEQ ID NO.11～12、0.85 μM。

4.根据权利要求1所述的荧光标记多重PCR艰难梭菌检测试剂盒，其特征在于：每个基因座所对应的2条引物中，至少有1条是经过荧光标记的。

5.根据权利要求1所述的荧光标记多重PCR艰难梭菌检测试剂盒，其特征在于：每个基因座所对应的2条引物中，至少有1条是经过荧光标记的，是采用FAM、HEX、TAMRA或ROX中的任意一种进行标记。

6.根据权利要求3所述的荧光标记多重PCR艰难梭菌检测试剂盒，其特征在于，试剂盒的组成如下：Reaction Mix 10.0 μL、基因组DNA 0.1～10μl、引物混合物5 μL、热启动Taq酶0.5 μL、sdH₂O补足至25.0μL；所述的Reaction Mix中含有MgCl₂ 7.5mM，Tris-HCl buffer 125mM，KCl 125mM，dNTPs 7.5mM ，BSA 2mg/ml。

7.一种基于权利要求1～6任一项所述的试剂盒的荧光标记多重PCR艰难梭菌检测方法，包括如下步骤：第1步、提取目标DNA样本；第2步、采用试剂盒的扩增体系对DNA样本进行多重PCR扩增；第3步、对扩增产物进行电泳，并对结果进行分析。

8.根据权利要求7所述的荧光标记多重PCR艰难梭菌检测方法，其特征在于，扩增中的扩增参数是：初始变性：95℃ 2分钟；热循环，94℃ 30秒，58℃ 30秒，72℃ 30秒，30循环；终延伸，72℃，10分钟。