[发明专利]一种羊肚菌液体培养发酵原种及制备方法以及用该原种进行液体培养的方法

说明书

技术领域

本发明属于菌种培养领域，具体涉及一种羊肚菌液体培养发酵原种及制备方法以及用该原种进行液体培养的方法。 

背景技术

羊肚菌是一种珍贵稀有的野生食药用菌，营养价值高。现代药理学研究表明，羊肚菌生物活性有效组分食（药）用真菌多糖的含量很高，其子实体多糖入药有消积杀虫的作用，能增强人体免疫功能，具有抗病毒、抗肿瘤作用，能降低胆固醇含量，防止动脉硬化等。 

目前虽有报道称已实现羊肚菌的人工栽培,但迄今未见商品化人工栽培羊肚菌的报道，究其原因主要是羊肚菌子实体形成阶段对空气十分敏感。利用野生子实体来提取羊肚菌多糖不但成本高，而且原料来源有限，以液体培养羊肚菌菌丝体和发酵液为主要原料提取多糖，既可降低成本又可提高生产效率，具有十分广阔的应用前景，而筛选适合羊肚菌液体培养的发酵工艺是提高羊肚菌多糖产率主要因素。 

传统的液体培养发酵工艺要经过接种、静置培养和摇瓶培养等多个步骤，而接种块的大小、薄厚及接种的好坏直接影响液体培养的产量，接种后菌种块必须浮在液面不能沉下去，这样静置后才容易形成更多的菌丝体，成功完成液体培养。 

发明内容

本发明的目的是提供一种产量高的羊肚菌液体培养发酵原种； 

本发明的另一个目的是提供一种该羊肚菌液体培养发酵原种的制备方法。

羊肚菌液体培养发酵原种是由羊肚菌一级种培养而成的菌种，以固体培养基在专用瓶或袋进行培养，用于羊肚菌液体培养，操作简单，菌丝生长快，发酵周期短，简化了传统羊肚菌液体培养过程中菌种逐级扩大培养的工艺。 

本发明技术方案如下： 

一种羊肚菌液体培养发酵原种，它由羊肚菌（Morchella sp.）经过接种培养后制得。

一种羊肚菌液体培养发酵原种的制备方法，包括下列步骤： 

A、羊肚菌液体培养发酵原种培养基包括下列质量份配比的组份，木屑15.0份—25.0份、麦麸65.0份—75.0份、玉米粉4.5份—6.0份、黄豆粉3.7份—5.0份，拌水量为上述组分总质量的120%—140%；

B、羊肚菌液体培养发酵原种的培养，将羊肚菌液体培养发酵原种培养基装袋灭菌冷却后，无菌操作接入羊肚菌（Morchella sp.），于23^OC—27 ^OC温度下恒温培养得羊肚菌液体培养发酵原种。

优选地，所述羊肚菌液体培养发酵原种培养基还包括下列组份，磷酸氢二钾0.10—0.20质量份，磷酸二氢钾0.10—0.25质量份，硫酸镁0.10—0.20质量份份的，维生素B₁10—15毫克/千克，维生素B₂10—15毫克/千克。 

优选地，所述羊肚菌液体培养发酵原种培养基在0.12MPa压力下灭菌1小时。 

用上述方法制备的羊肚菌液体培养发酵原种进行液体培养的方法，它包括下列步骤： 

A、液体发酵培养基制备：玉米粉100g,黄豆粉50g,硫酸镁10g，磷酸二氢钾15g，磷酸氢二钾15g，加水至10L，熬煮过滤后装入600ml三角瓶，每瓶装料300ml, 棉花塞封口，高压0.12MPa灭菌30min，冷却后可得液体发酵培养基；

B、羊肚菌液体培养，将权利要求4制备的羊肚菌液体培养发酵原种在无菌条件下搅碎，接入液体发酵培养基中，置于摇床上培养，以培养液清亮为培养终点。优选地，所述步骤B中羊肚菌液体培养以180r/min的转速，在25^oC温度下摇瓶培养。

本发明羊肚菌（Morchella sp.）801号购买于四川绵阳食用菌研究所。 

本发明以木屑、麦麸、玉米粉、黄豆粉为主要原料制作羊肚菌原种培养基，经过转接、培养后，形成一种用于羊肚菌液体培养发酵原种，此固体发酵原种无需静置培养，无需逐级扩大，接入液体培养基后可实现多个萌发点，可以简化传统液体培养发酵工艺，缩短发酵周期，提高菌丝体产量和发酵效率，操作简单，菌丝生长快，较传统工艺发酵周期缩短,羊肚菌胞外多糖含量显著提高。 

附图说明

图1是一种羊肚菌液体培养发酵原种制备方法的工艺流程图； 

图2是一种用羊肚菌液体培养发酵原种进行液体培养的工艺流程图;

图3是传统液体培养方法的工艺流程图。 

具体实施方式

下面的实施例可以使本领域的技术人员更好地理解本项技术，但不以任何方式限制本发明。