[发明专利]一种用于评估穿心莲抗菌活性的方法

说明书

技术领域

本申请涉及一种评估中药抗菌活性的方法，特别是涉及一种用于评估穿心莲抗菌活性的方法。

背景技术

穿心莲为爵床科一年生草本植物穿心莲Andrographispaniculata(Burm.f.)Nees的干燥地上部分，原产于印度、斯里兰卡、泰国、越南等地，我国于20世纪50年代开始引种栽培，主要分布于广东、广西、海南、云南等地，现在长江南北温暖地区均已引种栽培。穿心莲具有清热解毒、凉血、燥湿的功效，善治细菌性痢疾，临床上主要用于抗菌消炎，治疗呼吸道感染、急性菌痢、肠胃炎等疾病。

目前评价药物抗菌活性的方法有很多，常用的有荧光吸收法、稀释法、比浊法、光碟法、棋盘法等。然而，这些方法操作复杂繁琐，且受外在环境影响较大，精密度不高，并大多数为终点设计法，只在终端比较各种药物的抑菌活性，不能实时跟踪记录细菌生长代谢受药物干预产生变化的特征信息。

发明内容

本申请的目的是提供一种用于评估穿心莲抗菌活性的方法。

具体地，本申请提供一种用于评估穿心莲抗菌活性的方法，所述方法以穿心莲抑菌率I%来评估穿心莲抗菌活性，所述穿心莲抑菌率根据以下的公式（1）来计算：

I%=（t₂–t₀）/t₀×100%   （1）

其中，t₀为在未经药物干预的细菌生长代谢热谱曲线中的第二指数生长期的达峰时间，t₂为在经穿心莲干预的细菌生长代谢热谱曲线中的第二指数生长期的达峰时间，其中干预细菌生长代谢的穿心莲供试品溶液的浓度在0.4～4mg/mL之间，优选地为3mg/mL。

当然，本领域的技术人员将意识到，本申请的方法也可以应用到其它中药的抗菌活性的评估中。

在一些实施方式中，所述细菌可以为大肠杆菌、痢疾杆菌或绿脓杆菌。优选地，所述细菌可以为痢疾杆菌。

在一些实施方式中，可以如下获得所述未经药物干预的细菌生长代谢热谱曲线：

将含有接种了细菌的培养基的安瓿瓶放入微量量热仪的样品池中，用微量量热仪来跟踪记录未经药物干预的细菌生长代谢过程中的热谱曲线，当热谱曲线再次回到基线时结束试验，得到所述未经药物干预的细菌生长代谢热谱曲线。

在一些实施方式中，可以如下获得经穿心莲干预的细菌生长代谢热谱曲线：

用培养细菌的培养基和穿心莲样品来配置穿心莲供试品溶液，用微孔滤膜过滤除菌，备用，优选地用0.22μm微孔滤膜过滤除菌；

将穿心莲供试品溶液和接种了细菌的培养基两者加入到安瓿瓶中并混匀，然后将所述安瓿瓶放入微量量热仪的样品池中，用微量量热仪来跟踪记录经穿心莲干预的细菌生长代谢过程中的热谱曲线，当热谱曲线再次回到基线时结束试验，得到经穿心莲干预的细菌生长代谢热谱曲线。

本领域的技术人员将理解，由于本申请的细菌生长代谢热谱曲线是通过安瓿法来测量的，因此在参比池中放置的安瓿瓶子可以为含有空白细菌培养基的安瓿瓶。

其中，通过连接到微量量热仪的计算机通道数据采集器所实时记录的电功率数据且通过以下的公式（2）对指数生长期细菌的生长速率常数k进行计算：

P_t=P₀exp(kt)或lnP_t=lnP₀+kt   （2）

其中，P₀、P_t分别是细菌在指数生长的起始点和t时的热功率，t为细菌生长代谢的时间，将细菌生长代谢热谱曲线的两个指数生长期的P、t值代入公式（2）进行线性拟合，可得到细菌的第一、第二指数生长期的生长速率常数k₁、k₂。

其中，接种了细菌的培养基和穿心莲供试品溶液的混匀可以通过本领域的各种已知方法来实现，比如将安瓿瓶置于摇床中震荡3-5min。

在一些实施方式中，用于获得未经药物干预的细菌生长代谢热谱曲线或经穿心莲干预的细菌生长代谢热谱曲线的细菌可以为培养至第3代至第5代的细菌，优选地，可以为培养至第3代的细菌。

其中，在放入微量量热仪之前，细菌的培养可以通过本领域的各种已知的培养方法来实现，比如摇瓶培养法、斜面培养法、固体培养法等。

同时，在本申请中用到的细菌培养液可以是本领域已知的细菌培养基，比如LB培养基、肉汤培养基等。