[发明专利]载多西他赛和莱菔硫烷的自组装纳米粒的制备方法与应用

权利要求书

1.一种载多西他赛和莱菔硫烷的透明质酸修饰的聚乳酸羟基乙酸共聚物自组装纳米粒的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：

A、PLGA-b-HA的嵌段共聚物的合成

HA的末端经还原胺化形成丁二胺化的HA，然后再和PLGA的琥珀酰亚胺酯形成两亲嵌段共聚物；

B、载药PLGA-bHA纳米粒的制备

将多西他赛、莱菔硫烷和步骤A制备得到的PLGA-b-HA嵌段聚合物同时溶解于v/v=3:1的DMSO/DMF混合溶剂中，磁力搅拌15分钟；然后再缓慢的加入一定量的去离子水，继续搅拌15min后将该溶液转入到Spectra/Por,MWCO12000-14000的透析袋中，透析12小时除去有机溶剂，每两小时换水一次。

2.根据权利要求1所述的一种载多西他赛和莱菔硫烷的透明质酸修饰的聚乳酸羟基乙酸共聚物自组装纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤A中，所述的聚乳酸-羟基乙酸共聚物的分子量为10000-35000Da。

3.根据权利要求1所述的一种载多西他赛和莱菔硫烷的透明质酸修饰的聚乳酸羟基乙酸共聚物自组装纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤A中，所述的聚乳酸-羟基乙酸共聚物的分子量为13600Da。

4.根据权利要求1所述的一种载多西他赛和莱菔硫烷的透明质酸修饰的聚乳酸羟基乙酸共聚物自组装纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤A中，所述的透明质酸的分子量为3000-10000Da。

5.根据权利要求1所述的一种载多西他赛和莱菔硫烷的透明质酸修饰的聚乳酸羟基乙酸共聚物自组装纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤A中，所述的透明质酸的分子量为5600Da。

6.根据权利要求1所述的一种载多西他赛和莱菔硫烷的透明质酸修饰的聚乳酸羟基乙酸共聚物自组装纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤A为：

(1)末端胺化的HA的制备：按质量比1:30将HA溶解于pH=5.6、2%w/w的醋酸/醋酸钠缓冲液中，待HA完全溶解后加入1.0ml的1,4-丁二胺；50℃磁力搅拌形成亚胺，其后加入五分之一于HA质量的氰基硼氢化钠，然后将pH值调节到弱碱性继续于50℃磁力搅拌，并且在接下来连续两天分别再加入同等质量的氰基硼氢化钠；反应结束后，将反应溶液装入Spectra/Por,MWCO3500的透析袋中，在去离子水中透析；透析结束将袋内溶液冻干待用；

(2)NHS活化的PLGA的制备：按1:10m/v的比例将PLGA溶解于二氯甲烷中，再分别加入5倍于PLGA摩尔质量的N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，室温下磁力搅拌，反应结束后产物用冰冷的乙醚沉淀，再用冰冷的v/v为50/50的乙醚/甲醇混合液冲洗三次以去除过量的N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，然后将产物真空干燥待用；

(3)PLGA-b-HA的合成：精密称取一定量的PLGA-NHS和1.5倍于PLGA-NHS摩尔质量的丁二胺化的HA将其尽可能分散到一定量的DMSO中最终使PLGA-NHS的含量为25μg/ml，再加入N,N-二异丙基乙胺使其最终含量为1μg/ml，然后在50℃下搅拌48小时，反应结束后将该溶液装入Spectra/Por,MWCO12000-14000的透析袋中，在去离子水中透析，透析结束将袋内溶液冻干即得PLGA-b-HA嵌段共聚物。

7.根据权利要求1所述的一种载多西他赛和莱菔硫烷的透明质酸修饰的聚乳酸羟基乙酸共聚物自组装纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤B为：

将PLGA-b-HA嵌段聚合物和DTX按重量比为20:1的比例，或将PLGA-b-HA嵌段聚合物和SFN按重量比为1:1的比例溶解于v/v=3:1的DMSO/DMF混合溶剂中，使PLGA-b-HA的最终浓度为5-10mg/ml，然后在磁力搅拌下缓慢加入4.0ml的去离子水，继续搅拌将该溶液转入到Spectra/Por,MWCO12000-14000的透析袋中，透析除去有机溶剂。

8.一种如权利要求1-7任一方法制备得到的载多西他赛和莱菔硫烷的透明质酸修饰的聚乳酸羟基乙酸共聚物自组装纳米粒。

9.一种如权利要求8所述的载多西他赛和莱菔硫烷的透明质酸修饰的聚乳酸羟基乙酸共聚物自组装纳米粒在制备治疗乳腺癌药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的载多西他赛和莱菔硫烷的透明质酸修饰的聚乳酸羟基乙酸共聚物自组装纳米粒在制备治疗乳腺癌药物中的应用，其特征在于，该应用具体靶向已分化的乳腺癌细胞和乳腺癌干细胞。