[发明专利]一种实时FRET-PCR和巢式PCR检测和分型立克次氏体的引物、探针及试剂盒

权利要求书

1.用于实时FRET-PCR和巢式PCR检测和分型立克次氏体的引物及探针，其特征在于，由FRET-PCR引物、探针，以及巢式PCR引物组成，所述引物、探针的具体序列如下：

（1）FRET-PCR引物、探针：

FRET-上游引物：5’-TTRCAAATAGCAATAGAACTTGAAGCT-3’

FRET-下游引物：5’-ATCCAGCCTACGGTTCTTGCT-3’

6-FAM探针:5’-ATCGCTCTTAAAGATGAATATTTTATTGAG-6-FAM-3’

LCRed640探针:5’-LCRed-640-GAAAATTATATCCAAATGTTGATTTTTATTC-磷酸-3’；

（2）巢式PCR：

N-上游引物-1：5’-AGTAAATCCAATAATAAAAAATGCKCTTAATA-3’

N-下游引物-1：5’-ATTTTCTCTCAATAAAATATTCATCTTTAAG-3’

N-上游引物-2：5’-ATGAGCAGAATGCTTCTACTTCAACA-3’

N-下游引物-2：5’-AGCTTCAAGTTCTATTGCTATTTGYAA-3’。

2.用于实时FRET-PCR和巢式PCR检测和分型立克次氏体的试剂盒，其特征在于由以下构成：

1）实时荧光定量PCR试剂

20μl的扩增体系包含：10μl的样品DNA模板或者定量标准试剂、1xPCR缓冲液、1μMFRET-上游引物、1μM FRET-下游引物、0.2μM的6-FAM探针、0.2μM的LCRed640探针、2个单位的Taq酶、200μM dNTP；

2）巢式PCR试剂

巢式PCR-外部：

20μl的扩增体系包含：10μl的样品DNA模板或者定量标准试剂、1xPCR缓冲液、1μMN-上游引物-1、1μM N-下游引物-1、2个单位的Taq酶、200μM dNTP；

巢式PCR-内部：

20μl的扩增体系包含：10μl巢式PCR外部引物产物、1xPCR缓冲液、1μM N-上游引物-2、1μM N-下游引物-2、2个单位的Taq酶、200μM dNTP。