[发明专利]一种从红豆杉细胞培养生产的紫杉醇粗品中纯化紫杉醇的方法

说明书

技术领域

本发明涉及紫杉醇的纯化方法，具体涉及一种从红豆杉细胞培养生产的紫杉醇粗品去除难以分离的三尖杉宁碱和未知杂质物纯化得到符合美国药典USP标准的紫杉醇原料药的制备方法，属化合物纯化领域。 

背景技术

紫杉醇是从红豆杉属植物中分离提取的一种具有紫杉烷二萜骨架的新型抗癌药物，也是目前所了解的唯一一种可促进微管聚合和稳定已聚合微管的药物。它对大多数实体肿瘤有强力抑制作用，而对正常细胞基本无影响，尤其对晚期卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌和卡波济氏肉瘤的疗效确切、副作用较小。随着研究的进一步深入，紫杉醇类药物的抗癌作用得到更加广泛的应用，现已成为一线抗癌药物和广谱的抗肿瘤药物。

作为紫杉醇主要来源的红豆杉类植物属于珍稀物种，在我国被列为国家一级保护植物；并且紫杉醇在红豆杉树皮中含量极低，只约占0.01%。

所以虽然抗癌药物紫杉醇已在临床上广泛应用，但受原料红豆杉类植物稀有短缺的制约，远远不能满足市场对紫杉醇的需求，目前药源不足已成为限制紫杉醇在临床中大量应用的瓶颈。

近20年来，为了解决红豆杉资源稀有短缺与紫杉醇需求量日益增加的矛盾问题，人们主要从以下几个方面进行了紫杉醇原料的研究：化学全合成、化学半合成、人工栽培、微生物真菌发酵和红豆杉细胞培养等方法。其中红豆杉细胞培养法由于具有不破坏自然资源、不受自然条件限制、可在生物反应器中进行大规模培养，同时该方法还可生产出前体及其他有抗癌活性化合物等优点。因此，红豆杉细胞培养生产紫杉醇是当前解决紫杉醇药源问题很有前景的方法。

广东某药业有限公司利用红豆杉细胞大量培养技术生产紫杉醇的研究已经进行了一段时间，目前已经进入到中试放大阶段。所以从红豆杉细胞培养生产紫杉醇粗品中纯化得到符合美国药典USP标准的紫杉醇原料药的制备方法的研究和应用显得尤为重要。广东某药业有限公司采用红豆杉细胞培养生产的紫杉醇，其生产过包括生物因素、物理因素、化学因素等多个影响因素，在紫杉醇提纯过程中含有一些未知物非常难以除去。任何一个影响因素都会关系到紫杉醇的生产效率，同时也会影响到三尖杉宁碱和未知杂质物的含量。而且作为临床使用的药品，要求其纯度很高，美国药典USP标准的紫杉醇原料药要求其未知杂质不超过0.1%，欧洲药典EP标准则要求不超过0.05%。

另一方面，紫杉醇资源珍贵、价格高昂，分离的纯度和收率成为制备紫杉醇原料药成本的关键因素。基于上述因素，从利用红豆杉细胞培养生产的紫杉醇粗品中纯化得到符合美国药典USP标准的紫杉醇原料药的制备方法以及新型的纯化工艺已成为紫杉醇研究中的焦点问题。而对红豆杉细胞培养生产的紫杉醇粗品进行纯化，有效分离难以去除的一些未知物，最后得到符合美国药典USP标准的紫杉醇原料药的制备方法目前未见相关报道。  

目前常用的纯化紫杉醇与紫杉醇类似化合物的方法主要有柱层析法、结晶析出法、薄层色谱法、胶束动电色谱法、膜分离法、树脂吸附分离法、化学反应法等。但是，能够真正适用于今后大规模生产的仅有柱层析法和结晶析出法两种，其他方法都只局限于实验室研究。