[发明专利]一种携带丝氨酸乙酰转移酶基因的地衣芽孢杆菌菌株及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种携带丝氨酸乙酰转移酶基因的地衣芽孢杆菌菌株，所述菌株为地衣芽孢杆菌DW2(pHY300-cysE) [英文名称为：Bacillus licheniformis DW2(pHY300-cysE) ]，该菌株保藏在位于武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO ：M 2013402，保藏日期为2013年9 月10日。

2.一种权利要求1所述的一种携带丝氨酸乙酰转移酶基因的地衣芽孢杆菌菌株的构建方法，包括以下步骤：（1）从原始地衣芽孢杆菌DW2的总DNA中扩增出丝氨酸乙酰转移酶基因cysE基因片段；（2）在cysE基因片段上游连接启动子、下游连接终止子，构成完整的表达元件；（3）在表达元件的前、后分别加上EcoR I、Hind III酶切位点，构成目的基因片段；（4）采用EcoR I和Hind III限制性内切酶分别对目的基因片段和质粒pHY300PLK进行酶切，得到1284bp 的cysE片段和4870 bp的线性质粒片段；（5）将此1284bp 的cysE片段和4870 bp的线性质粒片段经DNA连接酶连接，得到表达载体pHY300-cysE；（6）将表达载体pHY300-cysE转入B.licheniformis DW2，以四环素抗性或氨苄青霉素抗性为筛选标记，筛选得到携带丝氨酸乙酰转移酶基因的地衣芽孢杆菌。

3.根据权利要求2所述的一种携带丝氨酸乙酰转移酶基因的地衣芽孢杆菌菌株的构建方法，其特征在于：步骤（2）中所述的启动子采用p43启动子。

4.根据权利要求2所述的一种携带丝氨酸乙酰转移酶基因的地衣芽孢杆菌菌株的构建方法，其特征在于：步骤（2）中所述的终止子采用淀粉酶终止子。

5.根据权利要求2所述的一种携带丝氨酸乙酰转移酶基因的地衣芽孢杆菌菌株的构建方法，其特征在于：步骤（2）中在cysE基因片段上游连接启动子、下游连接终止子均采用重叠延伸PCR进行。

6.根据权利要求1所述的一种携带丝氨酸乙酰转移酶基因的地衣芽孢杆菌菌株，其特征在于：其在杆菌肽生产中的应用，其应用步骤包括：A菌种活化，B种子发酵，C生产发酵。